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荆州市疾病预防控制中心运行机制的探讨(1)

                              作者:魏丽珍 温登瑰 单保恩 李巧霞 梁文杰 赵泽贞

【关键词】  水果

  【摘要】 目的  环境中的一些致癌致突变物常通过饮食进入体内,因此人们在减少环境污染的同时,提高饮食中的抗癌因素越来越受到专家学者的关注。为了进一步开发利用植物的新用途及研制保健品等,为肿瘤预防及肿瘤临床治疗提供参考。筛选了五种天然热带水果进行抗突变、致突变或抗癌、致癌同步试验研究。 方法  应用分子毒理学原理,采用SOS抗突变和致突变同步快速试验技术,进行了加与不加大鼠肝脏微粒体酶(S9)系统的试验和重复试验。 结果  五种检品柠檬、芒果、火龙果、柚子及人参果均未显示对丝裂霉素C的致突变毒性,除芒果未发现抗突变性外,其他4种检品均显示不同程度的抗突变阳性,柠檬最强,为强阳性(+++),柚子次之(++),火龙果和人参果均为弱阳性(+)。 结论  柠檬、火龙果、柚子、人参果可能有减少肿瘤化疗药物远期潜在毒副作用的功能,并在预防肿瘤方面有一定作用。
    
  关键词  水果 丝裂霉素C SOS试验 抗突变
      
  日前随着临床抗肿瘤化疗药物的广泛使用,医源性致癌因素亦逐渐增多,化疗药物在治疗肿瘤的同时又增加了患第二肿瘤的危险性 [1] 。对一些可食性中药及蔬菜的抗诱变及抗肿瘤作用报道较多 [2,3] ,而对天然热带水果抗突变及抗癌研究报道尚少。天然热带水果具有低糖、低脂、富含维生素及微量元素的优点,是深受国内外人士欢迎和喜爱的食品。丝裂霉素(mitomycin,MMC)是临床常用的抗肿瘤化疗药物之一,故在我室以往研究的基础上,筛选了5种检品应用分子生物学原理进行了抑制MMC的SOS反应检测。利用SOS抗突变和致突变同步试验技术做了加与不加大鼠肝脏微粒体(S9)系统的抗突变与致突变作用的试验及重复试验。
    
  1 试验材料
    
  1.1 标本来源 五种水果均购自石家庄北国超市鲜品。

  1.2 对照剂 抗突变阳性对照剂为100mg/ml维生素C(VitC),石家庄制药集团生产;致突变阳性对照剂为0.1mg/ml丝裂霉素(mitomycin,MMC),浙江海正药业股份公司生产;既不致也不抗突变对照剂为0.85%生理盐水(NS)。

    1.3 S9混合液 S9混合液中含2份S9原液和3份使用液,每皿加0.5ml。使用液由15mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液、3mmol/L的辅酶Ⅱ及10mmol/L MgCl 2 组成。

    1.4 培养基制备 每升LB液体培养基中含蛋白胨10g,酵母粉5g,氯化钠5g,pH7.2,每升半固体顶层琼脂中含琼脂6g,氯化钠0.8g,pH7.2。每升底层营养琼脂培养基含营养琼脂粉41g,按说明书配制。以上3种培养基均经103.43kPa高压灭菌30min。

    1.5 标准试验菌株 遇到诱变剂能产生SOS反应致细胞突变后释放噬菌体的菌株为大肠杆菌溶源性菌株GY5027,对该噬菌体敏感的指示菌株为GY4015,两菌株均由第二军医大学生物教研室提供,经鉴定符合病原生物学特性。
     
  1.6 试验原理 当GY5027菌株接触到致突变物致癌物即发生SOS反应造成基因突变释放出噬菌体,导致对该噬菌体敏感的GY4015菌体溶解,出现肉眼可见的噬菌斑。

  2 试验方法
    
  2.1 菌种活化、处理 将GY4015及GY5027分别接种于1ml的LB液体培养基中,37℃恒温水浴振荡(180次/min),培养15h。将GY4015及GY5027倒入无菌小离心管中,10000r/min,离心3min,弃去上清液,加入1ml的NS,混匀再次离心弃去上清液,再补充NS至1ml混匀,取其10μl加到NS0.99ml中混匀。将50ml半固体顶层琼脂加热融化后放入48℃恒温水浴中,30min后加入已处理的GY5027菌液50μl和GY4015菌液0.5ml,迅速振荡混匀,取其3ml注入到营养琼脂底平皿上,铺匀待凝。加S9的试验即在加入3ml顶层琼脂的同时加S9混合液0.5ml,并在冰盘上快速操作。

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