甲氧滴滴涕对孕鼠生殖及其胎鼠发育的影响(1)

                                             作者：王晓蓉，陈必良，马向东，常飞

【关键词】  甲氧滴滴涕；,生殖毒性；,发育毒性；,生殖激素

　　Reproductive and developmental toxicity of methoxychlor in pregnant mice and their foetuses

　　【Abstract】 AIM:  To explore the effects of  methoxychlor (MXC) on reproduction and development in mice. METHODS: The pregnant mice were administered by oral gavage with MXC at different doses of  0, 20, 100 and 200 mg/kg during day 12-17 of pregnancy. Meanwhile, other pregnant mice as a control group were gavaged sesame oil solvent in the same manner. The changes in body mass and number of corpora lutea of the pregnant mice were observed; and the body mass and anogenital distance (AGD) of their  F1 foetuses were recorded, too. The concentrations of estradiol (E2 ) and progesterone (P) in sera of the pregnant mice were determined using radioimmunoassay. RESULTS: Reproductive toxicity: with the increase of the administered MXC dose, the nidation quantity decreased, the AGD in the male foetuses exhibited shorter than that in the controls, and the concentrations of E2 and P in sera went up. Significant differences in these indexes were found between the MXC treated groups and the control group (P<0.05). Developmental toxicity: with the increase of the administered MXC dose, the gained weights of pregnant mice reduced, the quantity of live fetuses decreased, and the incidence of adverse pregnancy outcome (fetal death, absorption) went up. The difference among the differentdose MXC groups and the control group were significant difference (P<0.05). CONCLUSION: MXC can disrupt reproductive function, thereby resulting in dysgenesis and maldevelopment in mice.

　　【Keywords 】  methoxychlor; reproductive toxicity; developmental toxicity; reproductive hormone

　　【摘要】 目的: 研究甲氧滴滴涕(MXC)染毒对孕小鼠生殖和胎鼠发育的影响. 方法： 将交配成功的雌鼠于孕12～17 d每日给予不同剂量的MXC(0，20，100，200 mg/kg)灌胃,并设芝麻油溶剂为对照组，观察各组孕鼠体质量和黄体等计数测定，同时观察各组F1子代仔鼠的体质量和肛门生殖器距离等，采用放射免疫法检测孕鼠血清雌二醇(E2)和孕酮(P)含量.  结果：生殖影响：随染毒剂量增加，母鼠子宫着床数减少,雄性胎鼠肛殖距（AGD）缩短,孕鼠血清中E2和P水平升高, 呈不同剂量间差异,具有统计学意义(P<0.05). 发育影响：随染毒剂量增加孕鼠体质量增长减少，活胎数下降,不良妊娠结局(死胎、吸收胎数) 增多, 呈不同剂量间差异,具有统计学意义(P<0.05). 结论: MXC可干扰孕小鼠的生殖功能,导致生殖和胎仔发育毒性.

　　【关键词】 甲氧滴滴涕；生殖毒性；发育毒性；生殖激素

　　0　引言

　　环境污染对人类健康的影响一直是科学界所关注的问题. 甲氧滴滴涕(methoxychlor，MXC)作为一种替代滴滴涕的有机氯杀虫剂，其杀虫效果明显，而生物毒性相对较低，因而在全球范围内得到广泛应用. 但近年来的研究发现，MXC仍然具有诸多方面的毒性作用［1-2］，尤其以生殖毒性引人注目，并发现MXC及其代谢产物在体内外具有雌激素样作用和抗雄激素活性作用［3-4］ ，文建国等［5-6］也报道MXC对雄性生殖系统有一定的损害. 而MXC 对人类胚胎发育效应的研究报道较少. 我们采用MXC染毒并分组观测孕小鼠的各项生理指标，旨在探讨MXC对孕小鼠生殖和胎鼠发育方面的影响.

　　1　材料和方法

　　1.1材料

　　成年雄性昆明小鼠12只, 成年雌性昆明小鼠24只,体质量均(28±3) g,由第四军医大学实验动物中心提供,自由采食,饮水,室温20～22℃,昼夜交替为14/10 h. MXC标准品购自美国Sigma公司（纯度：99％，批号：49054）；芝麻油为市售的纯正芝麻油；雌二醇(estradiol， E2 )和孕酮(progesterone，P)放射免疫试剂盒购于北京北免东雅生物研究所；放免γ 计数仪，西安二六二厂生产，型号:2003PS；台式低温高速离心机，德国 kendro 公司，型号：D37520；电子分析天平，瑞士Mettler Toledo公司生产，型号：AG135.

　　1.2方法

　　1.2.1动物分组及染毒

　　雄鼠与处于动情前期的雌小鼠按1∶2 比例合笼交配, 于次日清晨对雌鼠阴道涂片检查精子,以发现阴栓和查到精子为孕0 d. 并按孕0 d体质量随机分为对照组（芝麻油组）,低剂量组（20 mg/ kg）,中剂量组（100 mg/ kg）和高剂量组（200 mg/ kg）4个组，每组动物均为6 只. 将MXC溶于芝麻油中，参照文献［7］的方法确定给药剂量，自妊娠第12日起每天灌胃染毒，灌胃量为0.8 mL. 对照组只给相当量的芝麻油. 至妊娠第17日下午（染毒后6 d）称重并处死孕鼠.

　　1.2.2孕鼠生理指标及妊娠结局观察

　　①体质量及增加的体质量变化: 自孕0 d开始直至处死之日，每天称小鼠体质量，并观察记录生长状况. 增加的体质量是指孕12,15和17 d孕小鼠的体质量与孕0 d体质量的差比较. ②黄体数，着床数等计数及妊娠结局：于妊娠第17 d剖腹统计胚胎着床数并在解剖镜下检测双侧卵巢黄体数目，记录活胎、死胎、吸收胎数及内脏外观畸形数，结果进行统计学处理.

　　1.2.3出生后各组F1子代生理及生殖指标检测记录

　　每窝胎仔数，并测量每窝胎鼠的体质量、身长、尾长、肛殖距（肛门与生殖器之间的距离）及性别比. 肛门与生殖器间距离（anogenital distance, AGD）目前已广泛用于评价男性化/男性体征消失指标的检测标准［8］.

　　1.2.4激素放免测定

　　将各组小鼠眼球摘除取血，37℃分离，收获血清，-20℃保存. 使用FJ2003PS放免γ计数仪测定血清E2和P，测定方法按放射免疫试剂盒说明书进行， 结果分别以pg/mL 和ng/mL单位表示.
 　
　　统计学处理: 采用SPSS 13.0软件进行数据处理, 计量资料进行单因素方差分析，多重比较采用SNKq检验法分析, 计数资料用χ2检验分析，P<0.05为差异有统计学意义.

　　2　结果

　　2.1各组孕小鼠体质量改变比较

　　各组小鼠孕0 d和孕12 d(MXC染毒前1 d)体质量及增长的体质量差异均无统计学意义（P>0.05）. 至孕15 d(染毒完成第3日),高剂量组的体质量和增长的体质量均显著低于对照组(P<0.05). 至孕17 d(动物被处死之日),中剂量组、高剂量组体质量和增长的体质量均显著低于对照组(P<0.05，表1).表1染毒孕小鼠体质量改变比较(略)

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