【关键词】 心肌梗死；,骨髓间充质干细胞；,血管内皮生长因子
【关键词】 心肌梗死；骨髓间充质干细胞；血管内皮生长因子
1 材料和方法
1.1材料
健康纯种新西兰大白兔48只，雌雄不拘，体质量2.0~2.5 kg，兔龄4~5 mo，由岭南科研动物中心提供. 低糖DMEM（Gibco产品）；Percoll分离液（Pharmacia产品）；VIII因子多克隆抗体及免疫组化检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；BrdU mAb BrdU检测试剂盒（Roche产品）；AdTrackCMVVEGF165真核表达质粒（由广东省人民医院中心实验室惠赠）；LipofectamineTM 2000 reagent(GIBCOL).
1.2方法
1.2.1实验分组
将兔随机分为4组（n=12），心肌梗死2 wk后在梗死区心肌梗死组（MI组）注射生理盐水； MSCs移植组（MSC组）注射107个MSCs； VEGF组注射VEGF基因（100 μg溶于200 μL PBS中）；MSCs+VEGF组（M+V组）注射107个转染VEGF基因的MSCs. 在移植前3 d进行VEGF基因转染.
1.2.2兔心肌梗死模型的建立结扎左前降支中段制作心肌梗死模型.
1.2.3兔骨髓干细胞的分离及培养于胫骨近端抽取骨髓血约4~6 mL，应用Percoll分离液(1.073 kg/L)离心提取MSCs，用含100 g/L胎牛血清的低糖DMEM 进行培养. 在细胞接近汇合时以1∶3的比例传代. 在移植前6 d用BrdU对细胞进行标记.
1.2.4pAdTrackCMV
VEGF165的制备及转染MSCs试验参照文献［2］的方法和说明书操作进行.
1.2.5血流动力学指标测定在移植后4 wk进行心功能测定. 经颈动脉插管至左心室，测定心率，左室平均收缩压，舒张未压，心室发展压，及左室压最大上升速率（+dp/dtmax）和最大下降速率（-dp/dtmax）.
1.2.6疤痕区MSCs的鉴定及计数取缝线标记区切片行BrdU免疫组化染色. ，计算视野内BrdU阳性染色细胞数作为MSCs数目. 切片染色后计算视野内的阳性细胞数，并取平均值作为该兔血管数目.
统计学处理： 数据采用SPSS 11.0软件进行处理，计量资料以x±s表示，组间均数比较采用t检验，计数资料以χ2检验进行比较， P<0.05为差异有统计意义.
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