作者：马楠 冯英明 张贺龙 纪统理 张伟 张惠中
【摘要】 目的：研究肝癌组织中的survivin的表达与HBV感染的关系. 方法：应用免疫组化法检测原发性肝癌组织45例，癌旁肝硬化组织25例，肝硬化组织18例，肝炎组织5例，正常肝组织10例中survivin的表达，同时检测原发性肝癌中HBsAg的表达. 结果：在45例肝癌组织中survivin阳性34例(75.5％)，阳性率高于癌旁肝硬化组织（44.4％），肝硬化组织（0），肝炎组织（0）和正常肝组织(0，P<0.001）. 肝癌中survivin的表达在Edmondson分级Ⅲ～Ⅳ级高于Ⅰ～Ⅱ级（P=0.014），而在年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、是否有门脉转移方面无统计学差异（P>0.05），survivin与HBsAg的表达呈正相关（P=0.014）. 结论：肝癌组织中survivin高表达说明其在肝癌发生发展中起重要作用，同时HBV感染对于survivin表达上调有一定作用.
【关键词】 存活素 癌 肝细胞 肝炎表面抗原 乙型 细胞凋亡 基因
0引言
肝细胞性细胞癌(HCC)是肝脏最常见的恶性肿瘤. 肝细胞的正常凋亡和增殖的平衡被打破会促使HCC的发生和发展［1］. Survivin属凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族新成员，在多数恶性肿瘤组织中高表达［2］. 我们采用免疫组化法检测survivin和HBsAg在肝癌组织中的表达，并探讨survivin与HCC临床病理特征、HBsAg的相关性及其临床意义.
1材料和方法
1.1材料1993/2003经手术切除并经病理学证实的HCC标本45例(其中带有癌旁肝硬化组织25例)，肝硬化组织18例，肝炎组织5例，所有病例术前均未行化疗和其它治疗. HCC标本中，男38例，女7例，年龄27～61（中位46.4）岁；肿瘤直径≤5 cm者15例，＞5 cm者30例；门脉癌栓者15例，阴性者30例. Edmondson分级Ⅰ～Ⅱ级16例，Ⅲ～Ⅳ级29例；TNM临床Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期29例. 标本经40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片. 10例正常肝脏组织标本作为对照组. 鼠抗人survivin mAb，鼠抗人HBsAg mAb，免疫组化SP法检测试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司.
1.2方法采用链霉抗生物素蛋白一过氧化物酶(SP)免疫组织化学方法检测survivin与HBsAg表达. 肝癌组织survivin蛋白表达的免疫组织化学染色按照SP法常规操作进行，以试剂公司提供的阳性对照片作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照. 光镜下观察免疫组化染色切片的显色反应，survivin染色定位于胞质，呈棕黄色，随机选择5个肿瘤区内200倍(20×10倍)视野，计算每个视野阳性细胞率，≥l0％判为阳性，<10％判为阴性. HBsAg染色定位于胞质，棕黄色为阳性，其阳性判断标准同survivin.
统计学处理：所得数据应用SPSS 11.0统计软件处理. Survivin的表达及其与各临床病理特征之间的关系采用χ2 进行检验分析，与HBsAg的相关分析采用spearman秩相关.
2结果
2.1Survivin在HCC中的表达Survivin蛋白主要表达于肝癌细胞质，SP染色可见胞质内棕黄色颗粒，阳性细胞在肝癌组织内呈散在分布. 在45例HCC中survivin阳性34例(75.5%, 图1A)，癌旁肝硬化组织25例survivin阳性11例(44.4%)，肝硬化组织，肝炎组织均无survivin阳性病例，正常肝组织survivin为阴性（图1B）. HCC组织survivin的阳性率高于癌旁组织和肝硬化组织和肝炎组织(P<0.001). Edmondson分级Ⅰ～Ⅱ级16例，survivin阳性8例，阳性率50％, Ⅲ～Ⅳ级29例，阳性26例(89.6%)，两者差异有统计学意义（P<0.05）. Survivin表达与病理分级有关而与年龄、性别、分期、肿瘤大小、转移无关（表1）.
2.2Survivin表达与HBsAg的关系HBsAg表达于HCC细胞，阳性细胞胞质呈棕黄色颗粒. 在45例HCC中HBsAg阳性30例(66.7%, 图2)，其中surivin阳性34例中HBsAg阳性26例. 采用spearman秩相关检验进行统计分析，得出survivin与HBsAg表达呈正相关（r=0.366, P=0.014）.表1Survivin表达与HCC临床病理特征的关系
乙酰肝素酶shRNA双基因共表达真核载体的构建和筛选
稳定表达丙型肝炎病毒复合多表位基因P815细胞克隆的建立