骨髓增生异常综合征淋巴细胞亚群及其激活状态的分析(1)

       作者：杨隽，王椿，谢匡成，颜式可，高彦荣，

               蔡琦，秦尤文，万理萍，蔡宇

【摘要】  　　本研究探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血T细胞亚群，B细胞，NK细胞数量及激活状态的临床意义。采用流式细胞术对30例MDS患者外周血T细胞，B细胞，NK细胞及其表面活化分子CD28，CD45RA，CD45RO，CD69，HLA-DR的表达进行检测和分析。30例MDS患者中低危组（RA+RAS）22例，高危组(RAEB+RAEBT)8例。结果表明：MDS组T细胞（CD3+细胞）的百分率低于正常对照组，CD4+CD45RA+细胞（未致敏CD4+细胞）的数值低于正常对照组。MSD组早期活化T细胞（CD3+CD69+细胞）和晚期活化T细胞（CD3+HLA-DR+细胞）的数值均显著高于正常对照组。低危组(RA和RAS)主要表现为T细胞活化功能的改变：早期活化T细胞（CD3+CD69+细胞）和晚期活化T细胞（CD3+HLA-DR+细胞）比例均增高，以及B细胞数量的减少。高危组（RAEB和RAEBT）主要表现为T细胞亚群数量的改变：CD3+细胞，CD3+CD4+CD8-细胞(T辅助细胞)数量的减少，CD3+细胞HLA-DR和CD69的表达并不增高。NK细胞数量减少。结论：MDS病人存在有T细胞数量和功能的异常，且随着病情的进展而发生改变，所以T细胞亚群及活化功能的检测对于判断疾病的进程和指导治疗具有重要的意义。

【关键词】  骨髓增生异常综合征；T细胞亚群；B细胞；NK细胞；激活标志

　　Evaluation of the Subsets    of Lymphocytes  and Their Activated Status   in Patients with Myelodysplastic Syndrome 

　　Abstract    This study was purposed to investigate  the clinical significance of the amount and activated status of T cell subsets，B cells，NK cells in peripheral blood from patients with myelodysplastic syndrome (MDS).  The proportion of T cells，B cells，NK cells in peripheral blood from 30 patients with MDS and their surface activation markers of CD28，CD45RA，CD45RO，CD69，HLA-DR were analyzed by flow cytometry. Twenty-two patients were in the low risk group (RA+RAS) while eight patients were in the high risk group (RAEB+RAEBT). The result showed  that the amounts of T cells (CD3+cells) in peripheral blood from patients with MDS were lower than those in control group .The amounts of naived CD4+ cells (CD4+CD45RA+ cells) in MDS patients were lower than those in control. The expression rates of early activation marker (CD69) and late activation marker (HLA-DR) on CD3+ cells in MDS patients were significantly higher than those in control. The abnormalities of the immunologically competent cells were mainly observed in the low risk group (RA+RAS)，and were characterized by the high expression rates of CD69+ and HLA-DR+ on CD3+cells，the decrease of  B cell amounts. The amount abnormalities of T cell subsets were mainly observed in high risk group (RAEB+RAEBT)，and were characterized by the decrease of CD3+ cells and CD3+CD4+CD8-cells (Th cells)    amounts without  high expression of the CD69 and HLA-DR，the decrease of NK cells amounts. It is concluded that there are the abnormalities of T cell subsets and function in the patients with MDS and may change with  disease progression，so the measurement of amonnt and activated status of T cell subsets in peripherat blood from MDS patients can have predictive role for diagnosis of disease progression and guide of therapy.

　　Key words    myelodysplastic syndrome; T cell subset;  B cell; NK cell; activation marker

    骨髓增生异常综合征（MDS）是一组由于造血干细胞突变而引起的恶性克隆增殖性疾病，该病具有异质性，以骨髓无效造血，三系细胞减少和形态学异常为特征。现有的临床资料表明，部分MDS病人用免疫抑制剂（如ATG，环孢菌素） 治疗有效，且MDS和其它各种肿瘤一样，可出现副瘤免疫现象，如血管炎，关节炎，Sweet综合症，Crohns病等。这些免疫紊乱的表现可出现在MDS发病之前、之后或同时发生。以上事实提示了MDS可能与免疫功能异常有关，但确切的机理尚不清楚［1］。本研究通过流式细胞仪三色荧光标记的方法对MDS患者外周血（PB）淋巴细胞功能及激活状态进行了分析，并探讨其临床意义。

　　材料和方法

　　研究对象

　　所有病例均系我院2003年5月至2004年12月住院或门诊的患者，共30例，根据FAB分型，难治性贫血RA 20例，RAS 2例，RAEB 6例，RAEBT 2例。其中女性13例，男性17例，中位年龄58岁（16-87岁），均为初治的病例。将RA和RAS分为低危组，RAEB和RAEBT分为高危组，病人情况详见表1。对照组15例，男性8例，女性7例，为我院工作人员和正常献血者，中位年龄45岁。Table 1. Clinical characteristics of the MDS patients

　　方法

　　取肘静脉血2 ml，2％EDTA-Na2抗凝，然后取抗凝血100  μl，加入放有三色荧光标记单克隆抗体组合(PE/FITC/CY5)的试管：CD3/CD4/CD8，CD3/CD(16+56)/CD19，CD3/CD4/CD28，CD3/CD8/CD28，CD4/CD45RA/CD45RO，CD8/CD45RA/CD45RO，CD3/HLA-DR/CD69（法国Coulter公司），混匀后室温闭光温育30分钟，用Coulter公司Immuno-PREP全血标本处理仪，经配套产品进行溶血，稀释和固定后，4小时内上流式细胞仪检测，配套软件取数和分析，以CD3+细胞设门圈定淋巴细胞进行分析（图1）。每个样本分析20 000个细胞，结果以阳性细胞的百分率（％）表示。

　统计学处理

　　所有资料均采用SPSS  11.5统计软件进行分析。数据经过正态性检验符合正态分布，故采用t检验分析，数据用均数±标准差（X±SD）表示。

　　结 果

　　MDS和对照组外周血中不同淋巴细胞亚群表型比较

　　MDS患者外周血中CD3+细胞（T淋巴细胞）的百分率低于正常对照组(P<0.05)，但绝对值无显著差异（表2），CD3+CD4+CD8-细胞（T辅助细胞）和CD3+CD4-CD8+细胞（细胞毒性/抑制细胞）的百分率和绝对值以及CD4/CD8的比值与正常对照组相比无显著差异(P>0.05)，其中CD4+CD45RA+细胞（未致敏CD4+细胞）的数值明显低于正常对照组(P<0.01)。CD4+CD45RO+细胞（活化和记忆CD4+细胞）、CD8+CD45RA+（未致敏CD8+细胞）和CD8+CD45RO+（活化和记忆CD8+细胞）的数值与正常对照组相比无显著差异(P>0.05)。CD3-CD19+细胞（B细胞）的数值低于正常对照组。CD3-CD(16+56)+ 细胞（NK细胞）、T细胞共刺激因子的表达（CD3+CD4+CD28+，CD3+CD8+CD28+）与正常对照组相比无显著差异(P>0.05)。早期活化T细胞（CD3+CD69+细胞）和晚期活化T细胞（CD3+HLA-DR+细胞）的绝对值均显著高于正常对照组(P<0.01)。Table 2. Comparison of the expression rates of T cell subsets of each groups （略）

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