第二介质在胶原引发血小板聚集的作用
细胞活化是血小板与胶原黏附的必要条件, GPⅥ在此过程中起主要作用,但是 GPⅥ介导的活化可被ADP和血栓烷等第二介质强化。这些可溶性活化诱导剂激活血小板并非与胶原直接接触，而是通过激活血小板上黏附胶原的整合蛋白α2β1和αⅡbβ3，促进信号转导。研究证明ADP是通过与G蛋白偶联的受体P2Y1和P2Y12激活血小板，当血小板被其他的诱聚剂激活，致密颗粒分泌ADP作用于P2Y1／P2Y12受体以自分泌和旁分泌机制促进血小板稳定聚集，这个信号转导途径协同GPⅥ信号促进整合蛋白活化。P2Y1偶联于Gαq，调节钙依赖的信号转导，引起血小板形状改变和快速、可逆的αⅡbβ3依赖性血小板聚集；P2Y12偶联于Gαi通过抑制腺苷酸环化酶产生cAMP来激活αⅡbβ3，这两个受体的相互关系是P2Y1启动聚集，P2Y12起加强作用［17］。当血小板通过α2β1途径结合胶原时，并不依赖于ADP和血栓烷等介质［18］。
GPⅥ活化途径的负性调节因子
血小板活化的信号转导能被血小板内皮细胞黏附分子1（platelet endothelial cell adhesion molecule 1, PECAM-1）抑制［19］。表达于血细胞及内皮细胞的PECAM-1(也称为CD31)参与白细胞跨膜迁移，调节细胞活化及凋亡等多个过程。当PECAM-1被激活后，通过Src家族酪氨酸激酶使其免疫受体酪氨酸抑制基序（immuno receptor tyrosine based inhibition motif， ITIM）磷酸化，募集酪氨酸、丝氨酸／苏氨酸或磷酯酶，随后抑制激酶依赖的信号转导。黏附受体的活化信号及PECAM-1抑制信号的平衡可调整血栓形成的刺激阈值，决定血栓大小和稳定度，防止血栓形成失控。
其他有争议的胶原受体
CD36（或GPⅣ）在上个世纪80年代晚期被认为是胶原受体，近来认为它是Ⅴ型胶原的特异性受体而非胶原的功能性受体，因为缺乏CD36的人或鼠，血小板对Ⅰ－Ⅴ型胶原的反应均正常［6］。另一个胶原受体是GPⅤ，它以非共价键与GPⅠb/Ⅸ相连，但其功能却不甚明了，不同的实验结果差异较大［1］，所以是否真正存在第三个功能性的胶原受体尚存在争议。 综上所述，血小板与胶原的黏附模式为：循环血流中血小板黏附到受损血管壁的第一步是vWF分子的A3区与暴露的胶原结合，vWF分子的A1区发生构象的改变，而与血小板GP-Ⅳ-Ⅴ复合物结合，使血小板间接黏附于胶原纤维，同时GPⅥ介导血小板与胶原直接结合；第二步，GPⅥ－胶原的相互作用产生细胞内信号将β1、β3整合蛋白转为高亲合力状态，并诱发可溶性诱导剂的释放（主要是ADP和血栓素）放大整合蛋白的活化，通过活化更多的血小板而介导血栓形成［20］。GPⅠb介导的信号转导可放大GPⅥ诱发的活化信号；最后，血小板通过活化的整合蛋白α2β1（直接作用）和αⅡbβ3（通过vWF或其他配体间接作用）与胶原牢固黏附。整合蛋白介导的黏附加强了GPⅥ与胶原的相互作用，引起信号转导增加，更上调整合蛋白活性，增加释放和促凝活性的表达，最终导致血栓形成。
GPⅥ与临床
GPⅥ在止血和血栓中的临床意义
尽管细胞外基质成分复杂，但血小板和胶原的黏附在体内启动止血和血栓起重要作用。抑制GPⅥ功能可在体外高切应力下显著抑制胶原诱导的血小板黏附、聚集和血小板血栓形成［21］。GPⅥ缺乏最重要的特点是患者血小板对胶原诱导的聚集无反应，但对其他诱聚剂反应正常。Boylan等［22］报道在一例ITP患者血浆中检测到抗GPⅥ自身抗体，虽然其GPⅥ基因正常，但血小板表面GPⅥ和FcRγ链几乎丧失，证实是其自身抗体特异性结合GPⅥ阳性血小板，清除血浆中可溶性GPⅥ，导致血小板不能结合胶原，也不能形成血栓。Samaha等［23］用流式细胞技术直接测定血小板表面的胶原受体密度，发现心肌梗死患者受体密度较正常对照增高，提示血小板胶原受体密度增高可能是心肌梗死患者新的危险因素。Bellucci等［24］报道2例恶性血液病患者胶原诱导的血小板功能障碍是由于GPⅥ偶联的信号转导通路受损。Nurden等［25］报道1例灰色血小板综合症患者伴有获得性GPⅥ缺乏，其胶原诱导的血小板聚集功能受损。
新型抗血小板药物的研究进展
血栓栓塞性疾病是当前危害人类健康的主要原因之一,血小板异常活化在血栓形成中起重要作用,因而研制开发抑制血小板黏附、释放、聚集功能和血小板活化的抗血小板药物是抗血栓治疗的一个重要策略。如抗血小板GPⅡb/Ⅲa单克隆抗体阿昔单抗能有效预防冠状动脉闭塞患者溶栓治疗和冠状动脉腔内成型术后的冠状动脉再栓塞，但存在治疗窗口狭小和并发出血等不良反应。血小板与胶原之间的相互作用是血小板黏附、聚集和活化的始动因素,因而成为研制新型抗血小板药物的主要靶点［26］。在小鼠体内动脉损伤模型中发现，经抗GPⅥ抗体处理的血小板不与损伤的动脉内膜发生黏附，也不在局部形成血栓［27］。体外试验也表明，抗小鼠GPⅥ单克隆抗体JAQ1对胶原诱导的血小板聚集有一定的抑制效应［13］，它可使循环血小板表面的GPⅥ内化和降解,产生GPⅥ基因剔除样现象，但不影响其他血小板受体如GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ等, 表明JAQ1是特异性阻断GPⅥ依赖性血小板活化通路。Qian等［28］应用组合抗体文库技术制备人源抗GPⅥ抗体,其中A10克隆可特异性抑制胶原诱导的血小板聚集。
Smethurst等［29］应用噬菌体抗体库技术筛选出抗GPⅥ ScFv抗体(10B12),可显著抑制胶原与GPⅥ的结合。因GPⅥ仅在血小板和巨核细胞上表达，针对GPⅥ为靶点的抗体对抑制血小板活化具有特异性的阻断作用,且GPⅥ缺乏患者仅表现为轻微的出血倾向，更容易耐受，故目前人们正积极寻找有效的GPⅥ拮抗剂，联合不同作用机制的抗血小板药物可能是抗栓治疗的一个方向。
结语
近年来，对血小板及胶原相互作用以及在启动止血及血栓作用的研究取得很大进展。GPⅥ作为主要的胶原受体参与血小板的初期黏附,并诱发一系列血小板由内到外的信号转导,活化血小板膜表面整合蛋白受体,导致血小板聚集和血小板血栓形成，故血小板GPⅥ结构和功能的完整性对正常止血功能的发挥和动脉血管内高切应力条件下的病理性血栓形成有重要影响。开发GPⅥ高度特异性抑制剂对基础研究很有价值并具有临床应用潜力。
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