DNA双链断裂修复蛋白在宫颈癌和CIN组织中的表达(1)-找论文网

作者：庄亮，于世英，黄晓园，熊慧华，李伟，曹阳，冷彦

【摘要】 目的研究DNA双链断裂修复蛋白（Ku80、DNAPKcs和ATM）在宫颈癌和宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织中的表达情况，探讨3种蛋白在宫颈癌发生发展中的作用及相互关系。方法应用免疫组化SP法检测41例宫颈癌组织和15例CIN组织中Ku80，DNAPKcs和ATM蛋白的表达情况。结果 Ku80、DNAPKcs和ATM蛋白在宫颈癌患者中的阳性率分别为70.7％、68.3％和19.5％，在CIN患者中的阳性率分别为80.0％、73.3％和33.3％；3种蛋白在宫颈癌组织中的表达均低于CIN组织，但差异无统计学意义（P>0.05）。3种蛋白的表达在不同年龄、病理类型、分化程度和临床分期的宫颈癌患者中差异无统计学意义（P>0.05）。Spearman等级相关分析，在56例患者中，Ku80与DNAPKcs的表达呈正相关（r＝0.583，P＝0.000）；Ku80与ATM的表达亦呈正相关（r＝0.274，P＝0.041）。结论 3种蛋白可能未在宫颈癌的发生发展中起主要作用；Ku80与DNAPKcs及与ATM之间存在密切关系。

【关键词】 Ku80；DNAPKcs；ATM；宫颈癌；宫颈上皮内瘤样病变

放射线主要是通过导致DNA双链断裂（DNA doublestrand break，DSB）起到杀死肿瘤细胞的作用，但细胞都有不同程度的DSB修复能力，修复方式有两种：以DNA依赖蛋白激酶（DNAdependent protein kinase，DNAPK，包括Ku80/Ku70异二聚体和DNAPK催化亚单位DNAPKcs）为主的非同源性末端连接（DNA nonhomologous endjoining，NHEJ）和以ATM（Ataxiatelangiectasia mutated）为主的同源重组（homologous recombination）修复[1]。本实验将检测Ku80、DNAPKcs和ATM蛋白在宫颈癌组织和宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）中的表达，研究3种DSB修复蛋白在宫颈恶性病变及癌前病变中的表达差异及相互关系，探讨其在宫颈癌发生发展过程中的作用，为临床治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

随机选取我院1998年3月～1999年12月确诊的宫颈癌患者41例，其中鳞癌35例，腺癌5例，腺鳞癌1例；按FIGO分期Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲa、Ⅲb、Ⅳ期分别为2例、6例、8例、2例、23例和0例；年龄24～78岁，中位年龄50岁。同时随机选取我院2002年确诊的CIN患者15例，年龄26～69岁，中位年龄46岁。上述患者病理检查前均未接受放化疗。

1.2 免疫组化检测蛋白表达

Ku80（稀释度1∶250）、DNAPKcs（稀释度1∶200）及ATM（稀释度1∶20）单抗均为美国Neomarkers公司产品；SP试剂盒、显色剂DAB购自北京中山公司。免疫组化染色按SP试剂盒说明书进行，PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性片作阳性对照。DNAPKcs和Ku80蛋白表达于胞核；ATM主要表达于胞核，部分表达于胞浆。根据着色程度分别记0分、1分、2分、3分。阳性细胞<10%记0分，10%～24%记1分，25%～49%记2分，≥50%记3分。综合判定取着色强度和阳性细胞百分数分值之积：0分为阴性，记为（-）；1分以上为阳性，其中1、2分记为（+），3、4分记为（++），6、9分记为（+++）。

1.3 统计学方法

SPSS11.5软件进行χ2检验及Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各蛋白在宫颈病变组织的表达

41例宫颈癌患者中，Ku80、DNAPKcs和ATM的阳性率分别为70.7％（29/41）、68.3％（28/41）和19.5％（8/41），阳性表达情况见图1～3。15例CIN患者中Ku80、DNAPKcs和ATM的阳性率分别为80.0％（12/15）、73.3％（11/15）和33.3％（5/15），阳性表达情况见图4～6。NHEJ途径修复蛋白Ku80和DNAPKcs在宫颈癌组织和癌前病变中表达均较高，且癌前病变高于癌组织表达，但差异没有统计学意义（P>0.05）。HR途径修复蛋白ATM在这两种宫颈病变中表达均比较低，虽在CIN患者中的表达率高于宫颈癌，但差异亦无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2 各蛋白的表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系

Ku80、DNAPKcs和ATM的表达与宫颈癌患者的年龄（以中位年龄50岁为界）、组织病理学类型（将腺癌和腺鳞癌合并）、分化程度和临床分期（将Ⅰ期、Ⅱa期合并，Ⅱb期、Ⅲa期和Ⅲb期合并）均无相关性（P>0.05），见表2。

2.3 各DSB修复蛋白在宫颈病变组织中的表达存在相互联系

由于41例宫颈癌患者与15例CIN患者中3种蛋白的表达差异无统计学意义，故将这56例宫颈病变患者的蛋白表达合并分析：Ku80表达情况为:表1 Ku80、DNAPKcs和ATM在宫颈癌和CIN组织中的表达表2 Ku80、DNAPKcs和ATM的表达与41例宫颈癌患者临床病理特征的比较将各蛋白的表达水平做Spearman等级相关分析发现，Ku80与DNAPKcs的表达呈正相关，相关系数r＝0.583，P＝0.000；Ku80与ATM的表达亦呈正相关，相关系数r＝0.274，P＝0.041；ATM与DNAPKcs间相关系数r＝0.254，但P＝0.059，提示两者无相关。说明Ku80与其它两种蛋白在表达上存在着密切的关系。

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