应用蛋白质组学方法研究大肠癌分化相关蛋白(1)-找论文网

作者：裴海平，曾亮，朱红，甘毅，李宜雄

【摘要】 目的研究人大肠癌高、低分化组织及癌旁正常粘膜之间蛋白质组表达差异，寻找和鉴定高、低分化癌组织之间差异表达蛋白。方法收集新鲜大肠癌标本，根据病理诊断结果分为高分化癌组、低分化癌组，以癌旁正常肠粘膜作为对照。提取组织总蛋白，进行双向凝胶电泳，对得到凝胶图谱进行合成、对比和差异分析，比较和寻找高分化与低分化组织之间表达差异点。将这些差异蛋白点进行肽指纹图分析及网上数据库鉴定。应用免疫组织化学方法检测组织中蛋白质表达。结果高分化和低分化癌标本中均存在钙网硬蛋白前体、O98007蛋白类似物的特异表达以及AAH10915、AAH75839蛋白表达上调；在高分化癌组中存在E980237蛋白的特异表达以及三磷酸异构酶、肝脂肪酸结合蛋白表达上调；在低分化癌组中存在2HHEB(氧化血红蛋白变异体)和锌指蛋白312类似物的特异表达以及Q9TQL5蛋白 (Fragment)类似物表达上调。HSP27在大肠癌高分化组的表达率显著高于低分化组。结论高分化癌组织与低分化癌组织之间存在蛋白质组差异表达，这些蛋白与大肠癌细胞分化有关。

【关键词】 大肠癌；组织分化；蛋白质组学

　　A Proteomic Study on Differences among High and Low Differentiation Colorectal Carcinoma Tissues

　　Abstract：Objective To explore the proteomic differences among the high and low differentiation colorectal carcinoma tissues by using twodimensional gel electrophoresis (2DE) and mass spectrometry. Methods In sample preparation, the fresh carcinoma tissue was cut off from the specimen and these tissues were classified into three groups according to the postoperative pathological diagnosis: high differentiation carcinoma，low differentiation carcinoma and normal epithelium. Protein separation was performed using 2DE. After silverstaining, the images of the gels were scanned and analyzed to find the differentially expressed proteinspots in each group. We acquired the peptide mass fingerprintings(PMF) of differentially expressed proteinspots by matrix assisted laser desorption/ionization timeofflight mass spectrometry(MALDITOFMS) and identified the proteins by data searching in the Mascotdatabase. Protein expression was assayed by immunohistochenistry. Results We detected calreticulin precursor and O98007like protein expressed exclusively and AAH10915和AAH75839 increased in both the two cancer groups. In high differentiation group, E980237 and tubulin beta chain expressed exclusively and triosephosphate isomerase and fatty acidbinding protein increased. In low differentiation group, 2HHEB and Zinc finger protein312like protein expressed exclusively and Q9TQL5like protein increased(over than 5 fold). The HSP27 positive rate is significantly higher in high differentiation group than low differentiation group. Conclusion Some differentially expressed proteins existed in high and low differentiation colorectal carcinoma as well as the normal colon mucosa.These proteins are related with colorectal carcinoma cell differentiation.

　　Key words：Colorectal carcinoma；Differentiation；Proteomics

　　0 引言

　　大肠癌是当前严重危害人类健康的恶性肿瘤 [1]。肿瘤分化程度是影响大肠癌预后的非常重要的因素。一般认为分化越差的肿瘤预后也越差，但其机制还没有完全阐明。国内外已有应用蛋白质组学技术研究大肠癌细胞株发生、耐药和转移机制的报道 [3，4]，在本研究中将蛋白质组学方法用于比较高、低分化大肠癌组织差异表达蛋白。

　　1 材料与方法

本研究中用于蛋白质组研究的组织标本取自中南大学湘雅医院普外科，共10例，经病理诊断5例为高分化腺癌（高分化组），5例为低分化腺癌（低分化组）； 10例配对的正常肠组织均距离肿块边缘至少15cm（对照组）。40例高分化大肠癌和40例低分化大肠癌组织取自湖南省肿瘤医院病理科。

　　IPGpHor电泳系统为Pharmacia公司产品；Protein II垂直平板电泳槽、PDQUEST 2D胶分析软件均为BioRad公司产品。质谱仪为英国Micromasss公司的电喷雾四极杆飞行时间串联质谱Micro QTOF。蛋白质组双向凝胶电泳分析试剂以及QTOF 质谱分析试剂的具体配制方法见参考书目 [2]。

　　1.1 组织蛋白质的提取

　　对组织标本进行裂解，低温匀浆，离心，将蛋白上清液吸出备用。使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（pierce公司）测定蛋白浓度。

　　1.2 固相pH梯度IEFSDS蛋白质组双向凝胶电泳分析 [6]

　　将蛋白样品上样。将IPG胶条放入电泳槽进行IEF电泳、冲洗、平衡；然后进行SDSPAGE电泳。将胶条进行固定、敏化、漂洗、银染、显影。凝胶进行扫描获取图像，用Imagemaster 2D Elite 4.01分析软件依次进行强度校正点检测、背景消减、匹配、1D及2D校正，建立平均凝胶，量化获取蛋白斑点，最后得到各组不同样本的平均蛋白质点数。蛋白斑点位置的重复性按Corbett法进行计算。采用方差分析即ONEWAY ANOVA F检验分析高分化组、低分化组和对照组间总蛋白质点数的差异。统计软件为SPSS10.0。

共2页: 1 [2] 下一页

应用自制组织芯片研究抑癌基因PTEN在口腔鳞癌中的表达

一种新的重组腺病毒载体pAdBM5GFPmAFP的构建