作者：赵勇， 高建飞，饶智国，欧武陵，朱宇泽，杜光祖
【摘要】 目的 探讨Cks1在胃癌发生及其在Skp2调节p27Kip1降解过程中的作用。方法 应用流式细胞术测定正常胃粘膜和胃癌组织中Cks1、p27Kip1、Skp2蛋白表达。结果 胃癌组织中Cks1、Skp2表达明显高于正常胃粘膜﹙χ2=22.69， Ｐ＜0.05；χ2=13.42, P＜0.05﹚，而p27Kip1表达则低于正常胃粘膜﹙χ2=14.83,P＜0.05﹚。胃癌中Cks1、Skp2表达与p27Kip1表达呈负相关﹙r=-0.649， P＜0.05；r=-0.732，P＜0.05﹚；而Cks1蛋白表达与Skp2蛋白缺乏相关性﹙P＞0.05)。胃癌中Cks1的表达与肿瘤分化程度相关（χ2=5.05, P＜0.05），而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期不相关（P＞0.05）。结论 Cks1可能参与了胃癌的发生；胃癌中Cks1可能参与了Skp2调节p27Kip1泛素化降解过程。
【关键词】 胃肿瘤；Cks1蛋白； Skp2蛋白； p27Kip1 蛋白
许多恶性肿瘤中细胞周期性蛋白p27Kip1表达是降低的，Fbox蛋白Skp2 ( S phase kinase protein 2，Skp2)参与了p27Kip1 泛素化降解过程。Cks1( Cyclin kinase subunit 1，Cks1)是高度保守的细胞周期调节蛋白Suc1/Cks家族成员之一，其在肿瘤组织中的作用及其与p27Kip1和Skp2的关联性尚不十分明确，我们用流式细胞仪检测正常胃粘膜和胃癌组织中Cks1、p27Kip1、Skp2的表达如下，以期对此问题找到解答。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
获取手术切除、经临床、病理证实的64例胃癌标本及20例正常胃粘膜组织。所有标本术前均未行放疗、化疗或免疫治疗。胃癌患者中，男34例，女30例；年龄22～78岁，平均年龄54.7岁。TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期23例，Ⅲ期19例，Ⅳ期10例。分化程度：高分化17例，中分化19例，低分化18 例，未分化10例。癌转移情况：淋巴结转移31例，无淋巴结转移33例；远处转移10例，无远处转移54例。胃壁浸润深度：浸润未超过浆膜层（T1＋T2）32例，浸润超过浆膜层（T3＋T4）32例。Cks1兔抗人单克隆抗体及Skp2鼠抗人单克隆抗体购自美国ZYMED公司，p27Kip1鼠抗人单克隆抗体购自丹麦DAKO公司。
1.2 方法
手术切除的新鲜组织，取无出血区部分组织块，PBS洗净血迹，机械破碎法制成单细胞悬液。将细胞悬液0.5ml加入两只小试管，PBS液洗涤一次，离心，弃上清，试管内加入兔抗人Cks1（或p27Kip1、Skp2）荧光多克隆抗体10μl，对照试管加入PBS，混匀，4℃孵育30min，PBS洗涤一次，离心，清除多余未结合抗体后上机检测。每1标本检测10 000个细胞。Cks1（或p27Kip1、Skp2）阳性率=[试管中Cks1（或p27Kip1、Skp2）阳性细胞数－阴性对照阳性细胞数]/10 000×100%。设阳性率≥10%为阳性表达，阳性率≥30%为高表达[1]。
1.3 统计学处理 采用SPSS 10.0统计分析软件进行χ2检验和Spearman等级相关分析，P<0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 Cks1、p27Kip1、Skp2的表达
胃癌组织中Cks1、Skp2阳性率明显高于正常胃粘膜组织(χ2= 22.69,P＜0.05；χ2=13.42, P＜0.05)，而p27Kip1阳性率则低于正常胃粘膜组织(χ2=14.83,P＜0.05),见表1。表1 Cks1、p27Kip1、Skp2在不同胃组织标本中的表达注：组间比较 P＜0.05 胃癌组织中Cks1表达与癌组织分化程度相关，低、未分化组Cks1表达阳性率明显高于高、中分化组(χ2=5.05, P＜0.05)，而与胃癌患者年龄、性别、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和临床分期不相关(P＞0.05）,见表2。
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