【摘要】 目的 采用流式细胞术方法检测食管癌、贲门癌患者细胞免疫功能。方法 应用三色免疫荧光流式细胞仪测定145名食管癌和贲门癌患者及18例正常对照者外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞、CD4+/CD8+比值。结合临床病理结果探讨二者之间的关系。结果 (1)食管癌、贲门癌患者外周血中CD8+T淋巴细胞比例较正常对照组明显升高（P＝0.030）；CD3+、CD4+亚群较正常值降低，但是没有统计学差异。NK细胞两组比较也没有显著性差异；(2)早期（0、Ⅰ期）食管癌、贲门癌病人和健康对照组之间T细胞各亚群相比没有统计学差异；中、晚期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）食管癌、贲门癌病人和健康对照组相比：CD4+明显降低（P＝0.023）；CD8+则明显升高（P＝0.021）；CD4+ /CD8+较正常有所下降，但是没有显著性差异；淋巴结阴性患者和淋巴结阳性患者比较T细胞各亚群没有明显差异。结论 外周血T细胞亚群的检测有助于提高对食管癌患者的病情，临床分期以及机体免疫状态的判断，晚期食管癌患者机体免疫状态成紊乱型改变。
【关键词】 食管癌 贲门癌 T细胞亚群 流式细胞术 临床分期
0 引言
恶性肿瘤患者往往伴有机体免疫机能低下和紊乱，免疫机能低下和紊乱对肿瘤发生发展起到一定的作用。流式细胞术分析T细胞亚群具有快速、多参数、可定量、操作简便等优点，国外已有较多报道。食管癌、贲门癌患者的机体免疫状态尤其是细胞免疫状态国内已有报道，但所用研究方法多为传统的免疫细胞学方法。本研究通过三色免疫荧光流式细胞术分析145名食管癌、贲门癌患者外周血T细胞亚群，并结合临床病理分期，分析食管癌、贲门癌患者细胞免疫状态的改变及其临床意义。
1 资料和方法
1.1 资料和方法
收集2004年6月～2005年8月在我科住院治疗的145名食管癌及贲门癌患者，所有病例抽血化验前均未行放、化治疗，并均经胃镜活检证实诊断。年龄29～85岁，男性105名，女性40名，平均年龄61.03岁。食管癌116例，贲门癌29例。病理类型食管癌鳞癌113例，贲门癌腺癌28例，食管腺鳞癌2例，贲门腺鳞癌1例，食管小细胞癌1例。其中127名患者经手术治疗并有相应的术后病理结果。18名患者未行手术治疗（转放疗科8人，转内科5人，其他原因未治出院5人）。以18名健康成年人作为对照组。145名患者和健康对照组于入院进行治疗之前清晨空腹抽静脉血2ml,EDTA钾盐抗凝。获得标本后立即送检。
1.2 肿瘤分期
肿瘤分期根据CT、胸片、腹腔B超及手术后病理结果采用UICC的TNM分期标准，其中0期原位鳞癌1例；Ⅰ期16例；Ⅱ期59例；Ⅲ期47例；Ⅳ期4例；没有分期资料18例。
1.3 试剂和仪器
试剂：美国Couter公司进口试剂，包括CD4－FITC／CD8－PE／CD3－Percp三色标记的单克隆抗体。仪器：美国Couter 公司Epics Xl型流式细胞仪。
1.4 三色免疫荧光染色
取CD4－FITC／CD8－PE／CD3－Percp三色标记的单克隆抗体20μl加入试管管底，加入待检验的经EDTA钾盐抗凝的全血50μl，混匀，避光室温下染色15min。然后加入OptilyseC 溶血素500μl，充分混合后立即上机检测。
1.5 流式细胞仪分析
使用Couter 公司配套的System Ⅱ系统软件数据处理系统。先进行光路流路的较准，较准后进行荧光补偿，然后上样本检测。
1.6 统计学分析
检测结果以均数±标准差表示。利用SPSS10.0处理试验结果，两组之间均数比较采用独立样本的双侧t检验，P<0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 T细胞亚群
CD3+、CD4+亚群较正常值降低，但是没有统计学差异。NK细胞两组比较也没有显著性差异，表1。表1 食管、贲门癌患者和正常对照组T细胞亚群比较食管癌、贲门癌患者外周血中CD8+T淋巴细胞比例较正常对照组明显升高（P<0.05）
2.2 T细胞亚群和临床病理分期的关系
2.2.1 早期病人和健康对照组T细胞亚群比较 早期食管癌、贲门癌病人和健康对照组之间T细胞各亚群相比没有统计学差异，见表2。表2 早期患者和健康对照组T细胞亚群比较
2.2.2 中、晚期食管癌、贲门癌病人和健康对照组T细胞亚群比较 CD4+ /8CD+较正常有所下降，但是没有显著性差异，见表3。表3 中、晚期患者和健康对照组T细胞亚群比较中、晚期食管癌、贲门癌病人和健康对照组相比：CD4+明显降低；CD8+则明显升高（P<0.05）
2.2.3 淋巴结阴性病人和淋巴结阳性病人T细胞亚群比较 淋巴结阴性患者和淋巴结阳性患者各T细胞亚群比较无显著性差异。表4 淋巴结阴性组和淋巴结阳性组比较注：6例探查病人按淋巴结阳性处理
紫杉醇和吉西他滨对鼻咽癌HNE2细胞系 协同放射增敏的作用
Stat3信号转导通路调控Caspase3表达促进结肠癌细胞凋亡