作者：韩彪，张现伟，刘健，蒋鹏
【摘要】 目的 探讨pRb2/p130、cyclinD1和MUC1在食管鳞癌中的表达及意义。方法 应用免疫组化法检测了pRb2/p130、cyclinD1和MUC1在16例正常食管粘膜上皮及60例食管鳞癌中的表达水平，分析它们与临床病理指标及其三者之间相关关系。结果 食管鳞癌中pRb2/p130的低表达与癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度有关；cyclinD1的高表达与癌组织的分化程度、淋巴结转移相关；MUC1的高表达与淋巴结转移相关；KaplanMeier生存分析表明pRb2/p130高表达组生存率高于低表达组（P=0.0032,Log Rank检验）；Cox比例风险模型分析显示pRb2/p130、淋巴结转移、癌组织的分化程度是食管鳞癌的独立预后指标。结论 食管鳞状细胞癌中存在 pRb2/p130的低表达以及cyclinD1和MUC1的高表达，促进了细胞的生长和肿瘤的发展，是食管癌发生发展中的重要事件。
【关键词】 pRb2/p130 cyclinD1；MUC1 免疫组化；食管鳞癌
Expression of pRb2/p130, cyclinD1 and MUC1 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma
Key words：pRb2/p130; cyclinD1; MUC1; Immunohistochemistry; Esophageal squamous cell carcinoma
我国是世界上食管癌高发区之一，患者的发病率和死亡率高，而预后差，严重威胁着人们的身心健康。寻找有效的肿瘤生物学标志物是提高食管癌患者的早期诊断、治疗的一条有效途径。Rb（视网膜母细胞瘤）家族蛋白pRb2/p130参与细胞周期的负调控，cyclins（细胞周期素）/Cdks（细胞周期依赖性激酶）复合物通过调控其磷酸化水平，来控制细胞周期的进行。在肿瘤组织中其异常表达引起细胞周期调控失常导致细胞癌变的发生。MUC1（粘蛋白1）是一种高糖基化、高分子量的糖蛋白, 正常情况下广泛分布于人消化道、呼吸道、乳腺等多种上皮组织中,对上皮起润滑和保护作用。而在肿瘤组织中MUC1多出现异常表达。pRb2/p130、cyclinD1和MUC1可能成为新型的肿瘤生物学标志物。我们应用免疫组织化学方法检测pRb2/p130 、cyclinD1和MUC1在食管鳞癌中的表达,从而探讨三者与临床各个病理参数之间的关系,为其应用于食管癌早期临床诊断、治疗及判断预后提供依据。
1 资料与方法
1.1 临床资料 标本选自1999年6月～2004年1月兰州大学第一医院手术切除并经病理证实为食管鳞癌标本60例，其中男36例、女24例，年龄在35～82岁，平均年龄为61.2岁。有60例患者随访10～52个月病历资料。高中分化鳞癌31例（G1＋G2），低分化鳞癌29例（G3）；TNM分期：Ⅰ期12例,ⅡA期12例,ⅡB期13例,Ⅲ期23例,Ⅳ期0例；参照1997年国际抗癌联盟（UICC）分期标准进行分期；有淋巴结转移36例（N1），无淋巴结转移24例（N0）；浸润至粘膜和粘膜下16例（T1）；浸润至肌层20例（T2）；浸润至纤维膜层24例（T3）。所取标本的患者术前未接受任何放疗、化疗。正常食管粘膜标本16例作对照。标本经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续4μm厚度切片。
1.2 试剂与方法 鼠抗pRb2/p130单克隆抗体（北京莱博生物实验材料研究所），鼠抗cyclinD1单克隆抗体、鼠抗MUC1单克隆抗体、DAB显色剂、ImmunoBridge+试剂盒（北京中山生物技术有限公司）。用已知pRb2/p130阳性乳腺癌、cyclinD1阳性食管鳞癌及MUC1阳性乳腺癌组织作为阳性对照，PBS代替一抗作空白对照。实验步骤按照试剂盒说明进行。
1.3 结果判断 pRb2/p130的阳性着色定位于细胞核和(或)细胞浆，cyclinD1的阳性着色定位于细胞核，MUC1阳性着色主要定位于细胞浆，棕黄染色作为阳性判断标准。每张切片由2名病理医师双盲观察，染色结果以阳性着色细胞数≤5％为阴性，阳性着色细胞数＞5％为阳性。
1.4 统计分析 应用SPSS10.0统计软件χ2检验，KaplanMeier法绘制生存曲线，Logrank检验进行生存分析，Cox比例风险模型进行统计学处理。(检验水准：α=0.05)
2 结果
2.1 pRb2/p130、cyclinD1和MUC1在食管鳞癌及正常食管粘膜中的表达 pRb2/p130阳性物质有胞核、胞浆及核浆三种表达形式，60例食管鳞癌中pRb2/p130阳性表达率为33.3%，明显低于正常食管粘膜上皮中pRb2/p130的表达率62.5%（P＜0.05）； cyclinD1阳性物质位于细胞核，60例食管鳞癌中cyclinD1阳性表达率为58.3%，与正常食管粘膜上皮中cyclinD1阳性表达率6.3%相比较,差异有统计学意义（P＜0.05）；MUC1阳性物质主要位于细胞浆，60例食管鳞癌中Cdk4阳性表达率为66.7%，与正常食管粘膜上皮中MUC1阳性表达率18.8%相比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 pRb2/p130、cyclinD1和MUC1的表达与食管癌临床病理学特征的关系 本研究60例食管鳞癌中，pRb2/p130的低表达与癌组织分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移状况差异有统计学意义(P＜0.05)；cyclinD1的高表达与癌组织分化程度、淋巴结转移状况差异有统计学意义(P＜0.05)；MUC1的高表达与淋巴结转移状况差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。
2.3 食管鳞癌中pRb2/p130、cyclinD1和MUC1三者表达的关系 配对χ2检验得出pRb2/p130、cyclinD1和MUC1三者在食管鳞癌中表达之间均有相关性(P＜0.05)，见表2。表1 pRb2/p130、cyclinD1和MUC1在食管鳞癌中 表达与临床病理学特征的关系表2 食管鳞癌中pRb2/p130、cyclinD1和MUC1表达的相互关系
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