维生素E琥珀酸酯下调mdr1/Pgp表达逆转K562/ADM耐药细胞的凋亡抑制(2)-找论文网

2 结果

2.1 VES诱导K562/ADM细胞凋亡

VES呈时间和浓度依赖性地抑制K562/ADM细胞增殖（P<0.01）， 24h、48h、72h和96h的IC50分别为77.9μmol/L、66.3μmol/L、49.7μmol/L和39.9μmol/L。经20μmol/L和40μmol/L VES处理后，K562/ADM细胞出现胞膜起泡，染色质凝集、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变，见图1。Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增高，20μmol/L和40μmol/L VES处理24h细胞凋亡率分别为29.0%和54.7%，48h为60.8%和74.8%。证实VES对K562/ADM细胞有明显的增殖抑制效应，并促使细胞凋亡。

2.2 VES下调K562/ADM细胞mdr1 mRNA表达，抑制Pgp合成K562/ADM细胞mdr1/Pgp呈高表达。20μmol/L和40μmol/L VES后，mdr1 mRNA表达下降，凝胶图像分析，48h的表达抑制率分别为8.78%和46.54%，见图2； Pgp合成显著降低，72h时Pgp表达阳性率由98.2%降低至87.8%～75.1%，表达强度（MFI）降低约50%，见图3。

2.3 VES上调K562/ADM细胞Caspase3基因mRNA的表达，增强Caspase3活性 K562/ADM细胞Caspase3基因mRNA呈微弱表达。经20μmol/L和40μmol/L VES处理，Caspase3 mRNA表达明显增高，凝胶图像分析显示分别增高24.3%和84.3%，见图2；Caspase3活性显著增强，活化Caspase3由9.3%增高至21.3%和39.8%，见图3。

2.4 VES增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性

20μmol/L和40μmol/L VES 与不同浓度ADM共同作用48h，对K562/ADM细胞产生联合增殖抑制效应（P<0.05），见图4。VES与ADM的联合效应可能是VES抑制K562/ADM细胞Pgp表达，提高耐药细胞对抗癌药物ADM的敏感性，逆转细胞抗药性和凋亡抑制。

白血病多药耐药（Multidrug resistance，MDR）的发生均伴随着细胞凋亡抑制（Apoptosis resistance）现象，绝大多数常规抗癌药物几乎不能诱导耐药细胞凋亡。K562/ADM细胞是经阿霉素（ADM）长期诱导而获得的mdr1/Pgp超表达的白血病耐药细胞，对ADM、柔红霉素（DNR）、米托蒽醌（MIT）、高三尖杉酯碱（HHT）和足叶乙甙（Vp16）等抗癌药物表现出复杂的交叉耐药[9]。近年研究发现，Pgp除作为一种能量依赖“药泵”主动性地将药物从细胞内排出而导致耐药外，还通过抑制Caspase3和Caspase8等的激活而介导耐药细胞的凋亡抑制[7,10,11]，因此，Pgp在白血病耐药细胞凋亡抑制的发生中起着关键作用。

维生素E琥珀酸酯（VES）作为一种潜在的肿瘤细胞生长抑制剂，其抗肿瘤作用机制包括抑制肿瘤细胞DNA合成，诱导凋亡；阻断细胞周期使肿瘤细胞停滞于G1期；诱导细胞分化；促进转化生长因子β（transforming growth factor β, TGFβ）分泌与活化及TGFβⅡ型受体的表达；促进肿瘤细胞表面Fas（CD95/APO1）的表达等[13,12]。我们以前的研究证实VES可抑制耐药白血病细胞增殖，并诱导其凋亡[4]。白血病细胞发生MDR后，其生物学特性发生了很大的变化，因此，VES诱导耐药细胞凋亡的机制也可能异于药物敏感细胞。本研究发现，VES诱导K562/ADM耐药细胞凋亡过程中，mdr1 mRNA表达水平和Pgp合成量显著降低，而Caspase3 mRNA表达水平和Caspase3活性则明显增高，呈剂量和时间依赖性；同时发现VES可显著提高K562/ADM细胞对ADM的敏感性。鉴于Pgp在白血病耐药细胞耐药性和凋亡抵抗中的关键作用，我们的研究结果提示VES诱导白血病耐药细胞凋亡的机制与其抑制mdr1/pgp表达，解除Pgp对Caspase3等的抑制效应，并增加抗癌药物的敏感性，从而逆转因Pgp高表达所介导的凋亡抑制和细胞耐药有关。

多药耐药白血病（肿瘤）细胞的凋亡抵抗现象和干预对策是目前肿瘤耐药研究的热点之一，鉴于维生素E及其衍生物的特性，深入研究其在干预白血病（肿瘤）耐药细胞凋亡抑制的作用及其可能的分子机制，将为临床耐药白血病（肿瘤）开发更新、更有效的治疗药物提供依据。

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