2.2 研究样本的群体代表性
对MM组和对照组中两个位点的基因型分布进行HardyWeinberg平衡检验，P值均大于0.05，确认两组研究样本具有群体代表性，是达到遗传平衡的群体。
2.3 两位点基因多态性的分布及相关性
2.3.1 TNFα-308位点基因型、等位基因在MM中的分布 对正常对照组和MM组进行基因型频率及等位基因频率的组间比较，结果显示在广东汉族对照组及MM病人人群中TNFα-308位点基因型频率及等位基因频率的分布均无显著性差异。
2.3.2 LT α+252位点基因型、等位基因在MM中的分布 MM患者三种基因型的频率与对照相比，差异无显著性（χ2 =0.857,P=0.651）,等位基因频率较正常组差异也无统计学意义高（χ2 =0.285,P=0.593）。
2.3.3 TNF α-308 /LTα+252位点联合单倍体分型在MM和对照组中的分布 用χ2检验分析发现TNFα-308/LTα+252两位点各基因型在MM病人中有相关关系（χ2=12.023，P= 0.017）。
2.4 TNFα–308 /LTα+252位点联合单倍体分型在MM组、对照组群中的分布
因两多态性位点相关且TNF2和LTα（5.5）等位基因可能增加TNF的产量，这促使本研究采用两位点联合单倍体分型而不是单位点来评估TNF基因多态性在临床和预后中的作用。将TNF2和LTα（5.5）等位基因视为高产型等位基因，联合单倍体分析的方法将上述两位点含两个及以上高产等位基因的定义为高危型，反之则为低危型。高危型包括TNF1/2和LT α（10.5/5.5）,TNF2/2和LT α（10.5/10.5），TNF1/1和LT α（5.5/5.5），TNF1/2和LT α（5.5/5.5）， TNF2/2和LT α（10.5/5.5），TNF2/2和LTα（5.5/5.5）；低危型包括TNF1/1和LTα（10.5/5.5）,TNF1/2和LTα（10.5/10.5），TNF1/1和LT α（10.5/10.5）。对正常组和MM组进行TNFα-308 /LT α+252位单倍体基因高危型、低危型组间比较，结果显示在广东汉族对照组及MM病人人群中单倍体基因高危型、低危型分布无显著性差异。
2.5 TNFα–308位和/LTα+252单倍体分型与MM的临床与预后的相关关系分析
用χ2检验分析TNF α-308位和/LTα+252单倍体分型在MM病人的性别、分期、肿瘤负荷、血红蛋白、血钙、血肌酐中的分布，没有发现两位点单倍体分型在上述临床指标中的分布有显著性差异。对以上病人进行追踪随访，追踪时间3～96个月，平均27.5个月，其中有21名病人死亡。用KaplanMeier方法进行生存分析，发现高危型与低危型的总生存时间无显著性差异：高危型组平均生存时间为37.33个月，低危型组平均生存时间为25.02个月，其2年生存率为62.50%比50.23%, 4年生存率为25%比25.12%（Logrank检验，P=0.9786）。Cox回归模型显示TNFα-308位和LTα+252位联合单倍体状态分组不是影响预后的危险因素（P=0.069）。
3 讨论
近年来的研究表明，TNF对肿瘤的作用呈双向性，既可杀伤肿瘤细胞亦可促使肿瘤细胞生长和浸润 [13]。由于TNF在肿瘤免疫、感染和炎症、淋巴组织的发生和功能中有一定作用且内源性TNF的产生是由基因决定的，所以TNF基因可能影响恶性肿瘤尤其是淋巴组织来源肿瘤的发生和发展。影响TNFα表达的多态性位点位于转录起始点上游308位（-308位）；影响LTα基因表达的多态性位点在该基因第一个启动子内，转录起始位点下游252位（+252位）[4,5]。本研究结果显示，中国广东汉族人群TNFα-308位多态性的基因型频率和等位基因频率在对照组和MM病人中无明显差别，这一结果与Zheng [6]在欧洲病人中的研究的结果相似，提示TNFα-308位点基因多态性在中国广东汉族MM病人发病的遗传因素中，可能不起重要作用。上述结果表明TNFα对MM影响的调节与基因调控的TNFα产生可能无关，其影响可能发生在MM病人TNFα受体或受体后水平。同时，本研究未发现TNFα-308位/LTα+252位联合单倍体分型与发病易感性有关，而Davies[7]对英国MM病人的研究却表明携有TNFα/LTα高产基因型的病人更容易发展为MM。这说明在不同种族的人群TNF基因多态性对NHL发病易感性的影响是不同的，反映了基因多态性作为疾病易感性遗传标记的复杂性。
本研究分析比较了联合单倍体分型与MM病人性别、分期、肿瘤负荷分级、血红蛋白、血钙、血肌酐中的分布，没有发现单倍体分型与上述临床指标有关，高危型组病人总生存时间与低危型组比较无明显差异，Cox回归模型未能得出联合单倍体分型影响预后的结论。这说明病人机体对TNF释放的遗传调节能力在MM病情的发展演化中不起重要作用。这与最近Neben [8]的结果有类似之处，他们的研究发现德国难治性MM血清中TNFα水平及治疗预后与TNF基因启动子-238位多态性而非-308位多态性有关。TNF基因有多个多态性位点，上述研究说明除考虑人种差异外，还应注意其它多态性位点在MM发病和病情发展中的作用。另外，一些研究显示TNFα和LTα与HLA基因簇内的另一些等位基因存在连锁不平衡。Wilson[9]曾提出–308位的TNF2等位基因与HLA-DR3等位基因存在连锁不平衡，对这些现象的机理还需作进一步的深入研究。总的来说，目前对这两个位点多态性与MM的研究国内外均还处于开始阶段，只有在考虑到其他TNF多态位点和种族差异、遗传异质性作用的基础上，进一步进行大样本的调查和连锁不平衡分析，才能明确TNF基因多态性与MM发生/发展间的关联性。
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