APC、βcatenin和cmyc在大肠癌中的表达及其意义(1)-找论文网

作者：戴文斌，任占平，陈蔚麟，杜娟，石喆，唐德艳

【摘要】 目的探讨APC、βcatenin和cmyc在大肠癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化方法检测30例正常大肠黏膜、30例大肠腺瘤、10例大肠腺瘤恶变及50例大肠癌组织中APC、βcatenin和cmyc蛋白的表达情况。结果大肠癌和大肠腺瘤恶变APC阳性率分别为44.0%、40.0%，显著低于大肠腺瘤（86.7%）和正常大肠黏膜（100%）（P<0.01）。大肠癌、大肠腺瘤恶变和大肠腺瘤βcatenin胞浆和(或)胞核异位表达率分别为62.0%、50.0%、30.0%，显著高于正常大肠黏膜（0）（P<0.01），大肠癌βcatenin异位表达率显著高于大肠腺瘤（P<0.01）。大肠癌、大肠腺瘤恶变、大肠腺瘤cmyc阳性率分别为56.0%、60.0%、46.7%，显著高于正常大肠黏膜（0）（P<0.01）。大肠癌中βcatenin膜表达缺失率为：46.0%，显著高于大肠腺瘤（10.0%）和正常大肠黏膜(0)（P<0.01），且与大肠癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期有关。APC蛋白表达与大肠癌组织分化程度有关。大肠癌中βcatenin异位表达与cmyc阳性表达呈正相关关系（r=0.63，P<0.01），而与APC阳性表达呈负相关关系（r=-0.39，Ρ<0.05）。结论 APC失表达和(或)βcatenin异位表达，激活癌基因cmyc过表达与大肠癌的发生、发展密切相关，可能是大肠癌发生的早期事件；βcatenin膜表达缺失与大肠癌的侵袭、转移有关。

【关键词】 大肠癌；APC；βcatenin；cmyc

大肠癌的发生、发展是一个多因素、多阶段、多基因异常改变的复杂过程。近年来，分子生物学研究发现Wnt信号传导通路成员各癌基因、抑癌基因的异常，激活下游相关靶基因的转录及细胞黏附分子异常与大肠癌的发生、发展密切相关，其中βcatenin在Wnt信号传导通路和细胞黏附中发挥关键作用。βcatenin具有双重功能，它是Wnt信号传导通路中的重要成员，βcatenin介导的Wnt信号传导通路异常激活与大肠癌的发生关系密切，同时βcatenin参与的Ecadherin/βcatenin复合体结构和功能异常在大肠癌的侵袭、转移中起重要作用。本研究应用免疫组化技术检测APC、βcatenin及cmyc蛋白在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠腺瘤恶变和大肠癌中的表达及其关系，以探讨Wnt信号传导通路及细胞黏附分子异常在大肠癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 资料随机抽取我院1998年1月～2002年12月大肠癌根治性切除经病理确诊的50例大肠腺癌及同期手术切除和结肠镜活检并经病理确诊的30例大肠腺瘤，10例大肠腺瘤恶变标本。其中取癌旁10cm以上正常大肠黏膜组织30例作正常对照。大肠癌标本中男27例，女23例；年龄19～81岁，中位年龄60.5岁。大肠癌组织学分型，乳头状腺癌1例，管状腺癌43例，黏液腺癌4例，印戒细胞癌2例，其中高分化腺癌11例，中分化腺癌22例，低分化腺癌17例。已浸润至浆膜层者37例，未及者13例；伴有淋巴结转移者13例，无淋巴结转移者37例。按Dukes分期，A期11例，B期26例，C期9例，D期4例。大肠腺瘤标本中，管状腺瘤19例，混合型腺瘤8例，绒毛状腺瘤3例，腺瘤伴轻、中、重度不典型增生各10例。

1.2 主要试剂与免疫组化方法

1.2.1 主要试剂浓缩型兔抗人APC多克隆抗体C20、鼠抗人βcatenin单克隆抗体SC7963、鼠抗人cmyc单克隆抗体SC40均购自美国Santa Cruz公司，工作浓度分别为：1∶200、1∶100、1∶100。Envision试剂盒购自福州迈新公司。

1.2.2 免疫组化所有标本均做4μm连续切片，作HE和免疫组化染色。按Envision二步法进行免疫组化染色，3种抗体孵育前，切片均经微波抗原修复，具体方法参照说明书。以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知大肠癌阳性组织作为阳性对照。

1.3 结果判断免疫组化染色阳性信号为细胞出现棕黄色细小颗粒。βcatenin染色结果判断标准按照Maruyama等[1]方法，分别从细胞膜、细胞浆、细胞核三方面判断βcatenin在细胞内的分布：细胞膜＞70%细胞阳性为正常表达，反之为表达缺失；细胞浆或细胞核＞10%细胞阳性为胞浆或胞核阳性表达，胞浆或胞核表达称为异位表达；细胞膜表达缺失、胞浆或胞核表达统称为表达异常。APC以细胞浆，而cmyc以细胞核＞10%细胞阳性为阳性表达，反之为阴性表达。

1.4 统计学处理运用SPSS10.0统计软件进行χ2检验和相关性检验。

2 结果

2.1 APC、βcatenin和cmyc蛋白在不同大肠组织中的表达

APC阳性表达定位于上皮细胞浆，见图1。βcatenin正常表达定位于上皮细胞膜，见图2。大肠腺瘤、大肠腺瘤恶变和大肠癌组织βcatenin胞膜表达不同程度缺失，βcatenin呈胞浆和(或)胞核异位表达，见图3。cmyc阳性呈胞核表达。正常大肠黏膜组织、大肠腺瘤、大肠腺瘤恶变、大肠癌组织中APC、βcatenin和cmyc的表达情况，见表1。表1 APC、βcatenin和cmyc蛋白在正常大肠注：*分别与大肠腺瘤恶变、大肠癌比较，P<0.01；**分别与大肠腺瘤、大肠腺瘤恶变、大肠癌比较，P<0.01；&与大肠癌比较，P<0.01；#分别与大肠腺瘤、正常大肠黏膜比较，P<0.01；△分别与大肠腺瘤、大肠腺瘤恶变、大肠癌比较，P<0.012.2 APC、βcatenin和cmyc蛋白表达与大肠癌临床病理参数的关系见表2。表2 APC、βcatenin和cmyc蛋白表达与大肠癌临床病理参数的关系注：*与未及浆膜层组比较，P<0.05；**与低分化组比较，P<0.01；#与有淋巴结转移组比较，P<0.01；△与A+B期组比较，P<0.012.3 APC、βcatenin和cmyc蛋白在大肠癌中表达的相关性见表3。表3 APC、βcatenin和cmyc蛋白在大肠癌中表达的相关性注：*βcatenin异位表达与cmyc阳性表达呈正相关，r=0.63；△βcatenin异位表达与APC阳性表达呈负相关，r=-0.39

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