作者：艾建中，姜广建，李玉红
【摘要】 目的 探讨增殖抑制基因（HSG）在结直肠癌中的表达及其意义。方法 应用免疫组化法检测HSG在结直肠正常粘膜、良性病变及恶性肿瘤组织中HSG的不同表达变化。结果 正常粘膜、良性腺瘤、结直肠癌组HSG的阳性表达率分别为94.2%、74.2%和50.9%，与正常粘膜组和良性腺瘤组比较，结直肠癌组HSG表达率下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；HSG蛋白表达与肿瘤分化程度无相关性(P＞0.05），而与肿瘤淋巴结转移和临床病理分期密切相关(P＜0.05）。结论 结直肠癌组织中HSG蛋白表达显著低于良性腺瘤和正常粘膜组织，提示HSG蛋白在结直肠癌演变中具有重要意义。
【关键词】 HSG；结直肠癌；良性腺瘤；正常粘膜
增殖抑制基因 (hyperplasic suppress gene,HSG) 是陈光慧等[1,2]利用 mRNA差异显示技术从正常血压和高血压大鼠的血管平滑肌细胞中发现的新基因。前期的研究表明，高血压动物模型中HSG在增生活跃的血管平滑肌中呈低水平表达，而且转染外源性HSG可明显地抑制血管平滑肌细胞的生长，转染外源性HSG对多种肿瘤传代细胞系同样也具有明显的生长抑制和诱导凋亡的作用[3]。本文旨在观察HSG在不同结直肠组织中的表达变化，初步探讨HSG对结直肠癌演变的影响。
1 资料和方法
1.1 临床资料
收集唐山市工人医院 2003 年 12 月～2005 年 12 月手术切除的直肠癌标本 53 例，高分化癌 20 例，中分化癌 20 例，低分化癌 13例；其中男24 例，女29 例，年龄41 ～75 岁，平均年龄 56 岁；Ⅰ+Ⅱ期 20 例，Ⅲ+Ⅳ期 33 例。淋巴结转移阳性31例，淋巴结转移阴性22例。所有患者术前均未进行放疗、化疗或激素治疗。以良性腺瘤标本31例和正常人粘膜组织37例做对照。
1.2 主要试剂
兔抗人 HRG1 多克隆抗体由北京大学陈光慧教授馈赠；免疫组织化学染色试剂盒购自美国Santa Cruz 公司。
1.3 实验方法
石蜡切片组织55℃烤4h后，常规脱蜡至水，3% H2O2 去除内源性过氧化物酶，蛋白酶K 37℃ 消化10min，兔血清封闭非特异性抗原，加入HSG抗体，室温过夜，生物素标记二抗，酶标三抗，室温孵育各20min，DAB 显色，苏木精复染核，脱水，透明和封片。
1.4 结果判定
HSG以细胞浆、细胞膜或细胞核出现棕黄色颗粒，且其着色强度显著高于背景者判定为阳性。
HSG计量方法：蛋白表达的判定以染色强度和阳性细胞百分率的得分之和进行评定。（a）染色强度：阴性为 0，弱阳性为 1，阳性为 2，强阳性为 3；（b）阳性细胞百分率：无阳性细胞为 0，＜25% 为1，26%～50%为2，＞50%为3，a+b之和最高为6，0～2判为阴性，3～6判为阳性。
应用Image Pro plus数码分析系统进行图像分析，在光学显微镜下随机选取5个视野，测定细胞的平均光密度值和累计光密度值，计算测得值的平均值作为最终值。
1.5 统计学分析
所有数据以±s表示，SPSS11.0软件处理。样本均数的比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义，计数资料采用χ2检验。
2 结果
2.1 HSG在结直肠不同组织中的表达
HSG 阳性染色主要集中于细胞核周围，呈棕黄色颗粒，细胞浆有少量表达，见图1、2、3。在结直肠癌中，HSG蛋白表达的平均光密度值和累积光密度值明显低于正常粘膜和良性腺瘤对照组（P＜0.05），而正常粘膜和良性腺瘤组的HSG值差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。表1 HSG在结直肠不同组织中的光密度值 *P＜0.01，同良性腺瘤组比较；△P＜0.01，同正常粘膜组比较 与正常粘膜和良性腺瘤组比较，结直肠癌组 HSG 表达率呈下降趋势，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。表2 HSG在结直肠不同组织中的表达 * χ2=4.389 P＜0.05 ,同良性腺瘤组比较；△χ2=16.729 P＜0.01,同正常粘膜组比较
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