【关键词】 去氧氟尿苷；注射液；有关物质；高效液相色谱法
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of the deoxifluridine injection related substance.Methods The separation and analysis was performed on a C18 column(4.6mm×150mm,5μm),the mobile phase consisted of water-acetonitrile -acetic acid buffer solution(pH6.1)(58:32:0.5).The flow rate was 1.0ml/min. The detection wavelength was set at 269nm.Loaded volume was 20μl. Results A good linear relationship was obtainted in the deoxifluridine injection 5.35~35.22μg/ml(r=0.9999,n=5).Conclusion The proposed method is sensitive ,accurate and simple ,and can be used for the determination of related substance of deoxifluridine injection.
【Key words】 deoxifluridine; injection; related substance; high performance liquid chromatography(HPLC)
去氧氟尿苷（Deoxifluridine）为5-氟尿嘧啶的衍生物，在肿瘤组织内受嘧啶核苷磷酸化酶的作用转化为游离的5-氟尿嘧啶而显示抗肿瘤作用。由于这种酶的活性在肿瘤组织内较正常组织为高，且专一性强，故本品在肿瘤内转化速度快、浓度高，对肿瘤具有较高的选择作用。临床用于胃癌、大肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、膀胱癌。去氧氟尿苷疗效高，毒性小，是一个具有特色的、国际公认的较好的抗癌药。本研究采用HPLC法［1，2］，建立了去氧氟尿苷注射液中有关物质的测定方法。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪(四元泵，自动进样器，紫外检测器，惠普色谱工作站，真空脱气机)（美国安捷伦公司）；去氧氟尿苷对照品（江苏省药品检验所标定），含量99.6%，供试品（自制，批号：060114、060115、060116），甲醇（色谱纯），其余试剂为分析纯，水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱： Diamonsil C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：水-乙腈-醋酸缓冲液（pH6.1，即取醋酸钠10.92g，加水100ml，用冰醋酸调至pH6.1）（58：32：0.5）；流速：1.0ml/min；检测波长：269nm；进样量：20μl；柱温：25℃。在上述色谱条件下，去氧氟尿苷的保留时间约为4.3min，理论板数不低于1000，去氧氟尿苷与相邻物质峰的分离度大于1.5。
2.2 专属性试验 精密量取去氧氟尿苷注射液适量，用水稀释制成约含去氧氟尿苷0.1mg/ml的供试品溶液，进样20μl，记录色谱图。另精密称取去氧氟尿苷对照品适量，用水溶解并稀释制成浓度为0.1mg/ml的对照品溶液，进样20μl，记录色谱图。取空白溶剂水及流动相直接进样20μl，记录色谱图。由色谱图可见，溶剂对去氧氟尿苷测定无干扰（见图1～3略）。
2.3 有关物质线性关系试验 精密称取于105℃干燥至恒重的去氧氟尿苷对照品约50mg于50ml量瓶中，加水适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1.0ml、1.0ml、1.0ml、1.0ml、05ml，依次置于25ml、50ml、100ml、200ml、200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取各浓度溶液20μl，注入液相色谱仪，记录峰面积（A），以峰面积A对浓度C进行线性回归，得回归方程为A=34581C+518.17（r=0.9999，n=5），线性范围为535～35.22μg/ml。
2.4 最低检测限 取“线性关系”项下的对照品溶液，稀释至约4μg/ml，进样20μl，测定色谱系统基线。按信噪比为3，测得去氧氟尿苷检测限为36ng/ml。
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