脑梗死患者Hcy及MTHFR基因多态性与颈动脉IMT的关系(1)-找论文网

【摘要】目的探讨Hcy、MTHFR C677T基因多态性与颈动脉IMT及脑梗死之间的关系。方法观察42例脑梗死患者和40例对照者，用循环酶法测定Hcy水平，采用聚合酶链反应－限制片长多态性方法检测MTHFR基因多态性，用彩色多普勒检查颈动脉IMT。结果病例组血清Hcy 浓度显著高于对照组；Hcy是颈动脉IMT增厚及脑梗死的促进因素；MTHFR基因多态性非颈动脉IMT增厚及脑梗死的危险因素。结论血清Hcy升高是动脉粥样硬化及脑梗死的独立危险因素，单纯的MTHFR尚不能认为是动脉粥样硬化及脑梗死的独立危险因素。

　　【关键词】脑梗死；同型半胱氨酸；5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶；颈动脉IMT

The relationship between homocysteine，MTHFR gene polymorphism and carotid intima-media thickness in cerebral infarction patients

【Abstract】 Objective To investigate the relationship of homocysteine(Hcy) level and genetic polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR) related to homocysteine metabolism with carotid intima-media thickness(IMT)in cerebral infarction patientsMethods In 42 cerebral infarction patients and 40 healthy people，serum Hcy level was measured by cyclophorase assay；MTHFR genetic C677T polymorphism was determined by polymerase chain reaction；carotid intimal-medial wall thickness was determined by the use of the duplex ultrasonographyResults The Hcy level in the patient group was significantly higher than that in the control group (P<0001) Hcy is related to the thickness of carotid intimal-medial thikness and cerebral infarction even after controlling for other traditional risk factors，but MTHFR genetic C677T polymorphism is notConclusion Serum Hcy but not MTHFR is the risk factor of artherosclerosis and cerebral infarction

【Key words】 cerebral infarction； homocysteine；5，10-methylenetetrahydrofolate reductase； carotid intima-media thickness

近年来，高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia，Hhcy)与血管病的关系日益引起重视。对Hhcy致脑梗死机制的研究主要集中在对动脉粥样硬化的影响上。 5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR) C677T 突变是引起Hhcy的主要遗传因素。颈动脉内膜－中膜厚度(intima－media thickness，IMT)作为反映全身动脉粥样硬化的一项早期指标已用于临床［1］。本研究目的在于探讨Hcy、MTHFR基因多态性与IMT及脑梗死之间的关系。

　　1 资料与方法

1.1 一般资料病例组来自2006年3月1日~10月31日北京同仁医院及普仁医院神经内科连续住院发病1周内的脑梗死患者，符合1995年第四届全国脑血管病学术会议制定的诊断标准，均经头颅CT 或MRI确诊，排除严重心脏疾病、急慢性肝肾功能不全、恶性肿瘤、酒精或药物滥用者及近3个月服用叶酸、VitB12、VitB6者，共42例，男31例，女11例，平均669±100岁。正常对照组来自同期健康体检及志愿者，既往无肝肾功能不全、心脑血管病及神经系统病史，共40例，男29例，女11例，平均626±93岁。

1.2 血清Hcy水平的测定取受检者空腹血3ml， 1ｈ内分离血清，血清标本-20℃保存备检。Hcy测定仪器采用贝克曼CX7生化仪；Hcy检测试剂盒采用北京九强公司生产的Hcy010GB180Z Hcy检测试剂盒，荧光检测器检测波长340ｎｍ，进样量18μｌ。

1.3 颈动脉IMT的检测应用 EP LOGZQ9 双功能彩色多普勒超声仪检查，检查部位包括双侧颈总（CCA）、颈内动脉(ICA)，IMT于CCA分叉近端1cm处后壁及分叉水平上方、球部以远1cm处测量或IMT最厚处，左右颈动脉各测量3次，取3次的平均值，IMT 超过10mm为颈动脉内膜增厚。

1.4 MTHFR C677T基因多态性检测（1）提取外周血DNA。（2）PCR 体外基因扩增：引物根据文献设计［2］，由上海生工生物工程技术有限公司合成， P1:５'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'； P2: '-AGGACGGTGCGGTGAAGAGTG-３'。引物2OD，去离子水200μl备用。ＰＣＲ反应体系为天根生物工程公司提供的25μl反应体系（PCRPreMix）。加入模板4μl、引物Ｐ１和Ｐ２各1μl，再加去离子水配至25μl。循环条件：预变性94℃ 5min，解链94℃ 30s，退火62℃ 30s，延伸72℃ 30s，35循环周期后72℃再延伸7min。2%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物，扩增片段大小为198b，置－20℃冰箱保存待用。(3)PCR扩增产物的限制性内切酶片段长度多态性分析： PCR扩增产物10μl，HinfⅠ１μl（10ｕ），缓冲液2μl，用去离子水补足至20μl，37℃水浴消化6h。3％琼脂糖凝胶电泳检查酶切结果。

1.5 统计学方法用SPSS11.5软件进行统计分析，计量资料用±s表示。Hcy呈偏态分布，以几何均数和四分位数间距表示。对各组数据进行正态性检验，对不符合正态分布的数据进行转换使其符合正态分布。等位基因频率= (纯合子例数×2+杂合子例数) ×1/ 2×1/n (n代表总例数)。计数资料用卡方检验，计数资料用方差分析，颈动脉IMT及脑梗死的危险因素用Logistic 多元回归分析。

　　2 结果

2.1 MTHFR基因型和等位基因频率分布脑梗死组与正常对照组C/C型与 C/T及T/T基因型频率分布有统计学差异(P＝0001和P=0003) C/T型与T/T型频率分布无统计学差异(P>005)。脑梗死组与正常对照组C/T等位基因分布差异有显著性 (P<001)。见表1。表1 2组MTHFR基因型及T等位基因频率例(%)组别例数 MTHFR基因型 C/C C/T T/T 等位基因 T C病例组 42 5(119)* 23(548) 14 (333) 51(607)** 33 (393)对照组 40 19(475)* 13(325) 8(200) 29(362) 51(638) 注：组内比较*P<0017，与对照组比较**P<001

2.2 血清Hcy水平的比较

2.2．1 不同基因型血清Hcy水平比较脑梗死组与正常对照组C/C、 C/T及T/T基因型血清Hcy水平均呈递增的趋势，但无统计学差异（P>005）。脑梗死组血清Hcy水平较正常对照组高，差异有显著性（P<0001）。见表2。表2 MTHFR各基因型Hcy的水平组别例数 C/C C/T T/T病例组 42* 2230(2040~2480) 2259 (1540~3040) 2634(1735~3910)对照组 40 1126 (914~1210) 1295(1010~1635) 1644(1398~1780) 注：与对照组比较*P<0001

2.2．2 不同叶酸水平情况下血清Hcy水平比较根据血清叶酸水平分为叶酸正常组和叶酸降低组。正常对照组与脑梗死组的Hcy水平在去除血清叶酸水平的影响后，C/C基因型的Hcy水平较C/T及T/T型低，差异有显著性(P<001和P<0001)，见表3。表3 血清叶酸及MTHFR基因多态性与Hcy的关系 (±s)组别例数 C/C C/T T/T正常叶酸组 65 1245±480 1554±475* 2108±1010**叶酸降低组 17 2410±1102 3660±1680* 5767±2547** 注：与CC组比较*P<001，与CC组比较**P<0001

2.3 IMT与Hcy、MTHFR基因多态性及其他动脉粥样硬化危险因素间的相关分析以颈动脉IMT是否增厚为因变量，Hcy、MTHFR基因多态性、性别、年龄、吸烟、高血压、糖尿病、脑血管病史、收缩压、舒张压、血糖、纤维蛋白原、叶酸、TC、 HDL、TG 和LDL 为自变量，进行Logistic回归分析显示Hcy(P=0022)、年龄(P＝001)及吸烟(P=0042) 是CCA IMT的危险因素。Hcy（P=0001）、血糖（P=0 021）、高血压病史(P=0000)是ICA IMT的危险因素。

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