作者：胡怡秀，刘秀英，马征，胡春生，张莹莹，尹进
【关键词】 苦瓜水 雄性小鼠精子
苦瓜作为一种药食兼用的草质藤木植物的果实，民间食用已有数百年历史，其药用价值越来越被人们所关注。随着研究的深入，人们发现苦瓜有较多的保健作用〔1-3〕和广阔的临床应用前景。对苦瓜的毒性研究发现，苦瓜对雄性动物具有较强的抗生育活性〔3〕。国内外学者采用不同方法对苦瓜食用部分进行了分离提取及鉴定，从苦瓜中曾分离出苷类、蛋白质、多肽、氨基酸、糖类、生物碱类、有机酸、脂类、甾类、萜类、微量元素等多种化学成份〔4〕。由于提取方法不同，导致苦瓜提取物成分各异，不同提取物的生物学作用亦不同。因此，本实验观察了苦瓜提取物对雄性小鼠精子的影响，旨在为更好地开发利用苦瓜系列产品提供科学依据。现报告如下。
1 材料与方法
11 材料
111 苦瓜水提取物
由湖南师范大学化学测试分析中心提供。
112 实验动物及饲养
清洁级昆明种小鼠，体重25～35?g(南华大学实验动物学部)；实验动物生产许可证号为SCXX(湘)2004-0009，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。实验期间动物房环境温度为21～24℃，湿度为56%～58%。
12 方法〔５〕
将25只小鼠随机分为5组，每组5只。试验组设10?000，5?000，2?500?mg/(kg·bw)3个剂量，采用40?mg(kg·bw)剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照，小鼠按20?ml/(kg·bw)体积灌胃，每日1次，连续5?d，于末次灌胃后的第30?d处死动物，取两侧副睾，按文献〔5〕制备精子悬液。
121 精子计数〔6〕
将精子悬液滴入细胞计数池内，用高倍镜计数中央大格内5个中方格的精子数，结果乘以10９即为每升悬液中的精子数。
122 精子活动率〔6〕
于(20±2)℃的室温下，在10?min内完成每只鼠1?000个左右精子活动力的观察，取悬液滴片，显微镜下将精子活动状态分为4级：Ⅰ：运动活泼，直线运动；Ⅱ：运动欠活泼，直线游动；Ⅲ：原地旋转，动作迟缓；Ⅳ：毫无活力，并按下式计算精子活动率：
精子活动率(%)=Ⅰ+Ⅱ+ⅢⅠ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ×100
123 精子存活率采用伊红试验〔7〕。
取精子悬液和05%伊红水溶液各1滴混合，在1?min内高倍镜检查。活的精子不着色，死的精子染成淡红色或淡黄色，计算存活率。
124 精子形态学观察〔5〕
将精子悬液用4层擦镜纸过滤，吸滤液涂片，干燥后甲醇固定5?min，2%伊红染色1?h，用水轻冲、干燥。每只动物计数1?000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率。
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