环孢素A慢性肾毒性及丹参保护作用(1)

【关键词】  环孢菌素类；药物毒性；丹参

　　摘要： 目的  探讨环孢素A(CsA)慢性肾毒性的发生机制及丹参对其的保护作用。方法  将雄性大鼠随机分为对照组、模型组及丹参组,分别给予橄榄油、CsA+葡萄糖及CsA+丹参注射液。观察给药前和给药28d后各组大鼠24h的尿量及肾功能；观察给药28d后各组大鼠血浆肾素-血管紧张素系统(RAS)及肾脏组织学变化。结果  CsA能诱导肾小球滤过率下降，增加尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的排泄，血浆肾素活性（PRA）、血管紧张素II（AngⅡ）水平明显升高，导致肾间质纤维化和小动脉病变等；丹参能使血浆PRA、AngⅡ水平减低，并能改善肾脏功能及病理变化；各组之间血浆醛固酮水平无变化。结论  CsA的慢性肾毒性损伤可能与RAS的激活，尤其是与AngⅡ的增加有关；丹参能使血浆PRA、AngⅡ水平降低，对CsA的慢性肾毒性有明显的保护作用。

　　关键词：环孢菌素类；药物毒性；丹参

　　Cyclosporin-induced chronic nephrotoxicity and preventive effects of salvia compound 

　　Abstract： Objective  To explore the mechanism of cyclosporin-induced chronic nephrotoxicity and the preventive effects of salvia compound.Methods  Thirty adult male rats were randomly allocated into 3 groups.Group A received olive oil as control.The rats in group B received cyclosporin A (CsA) and glucose injection.The rats in group C received CsA and compound salvia injection.The amounts of urine in 24 hours and renal function were measured before and after the drugs were given.The levels of plasma renin activity(PRA),plasma angiotension II (Ang II) and Aldosterone(ALD) were also measured after the rats were given CsA and compound salvia injection for 28 days,and also the changes of renal tissues were assessed by histological examination.Results  CsA can induce the decrease of glomerular filtration rate (GFR) ,increase the excretion of n-acetyl-β-d-glucosaminidase（NAG）in urine ,and increase the levels of PRA and Ang II in blood obviously ,and induce the tubulointerstitial fibrosis and the injury of renal arterioles .But salvia compound can decrease the levels of PRA and Ang II,improve the function of kidneys and the pathological changes .There was not significant difference in ALD levels among 3 groups.Conclusion  Cyclosporin-induced chronic nephrotoxicity may be related to the activation of renin-angiotensin system (RAS) ,especially to the increase of AngⅡ levels.Salvia compound can decrease the levels of PRA and AngⅡ,and have preventive effects on chronic nephrotoxicity.

　　Key words：cyclosporins;drug toxicity;salvia compound
   
　　环孢素A(cyclosporin A,CsA)是目前器官移植术后广泛使用的免疫抑制剂，但肾毒性是限制其临床应用的主要副作用。拮抗CsA引起的肾间质纤维化，是器官移植后保障患者长期存活的重要措施之一。慢性肾毒性机制目前尚不十分清楚，有报道认为，与肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)密切相关〔1〕。本研究采用口服剂型CsA慢性肾毒模型，观察慢性肾毒性时肾脏功能、RAS及病理的变化，探讨慢性肾毒性的发生机制，并应用丹参为干预措施，观察其对CsA慢性肾毒性的保护作用。

　　1  材料与方法

　　11  动物  雄性SD大鼠30只，体重220～280g（河南省实验动物中心）。

　　12  实验用药  CsA口服液（瑞士诺华公司），含CsA100mg/ml。使用前用橄榄油稀释，使CsA浓度为25g/L；复方丹参注射液（四川升和制药公司），含丹参2g/ml。

　　13  实验方法  采用随机区组设计将动物随机分为对照组、模型组及丹参组，每组10只。对照组为 橄榄油(CsA溶剂)；模型组为CsA和葡萄糖；丹参组为CsA加复方丹参注射液。按实验设计，控制室温为20～25℃，3组大鼠给予低盐饮食1周，收集24h尿液，记录尿量，然后断尾采血。此后在灌服橄榄油或CsA前30min，对照组和模型组大鼠每天经腹腔注射5%葡萄糖注射液4ml/（kg・d）；丹参组大鼠每天注射复方丹参注射液4ml/（kg・d）。然后对照组大鼠每天灌服橄榄油12ml/（kg・d）；模型组、丹参组大鼠每天分别灌服CsA 12ml/（kg・d）。观察期间大鼠自由进食进水，各组大鼠每7d称体重1次，调整CsA、橄榄油及丹参用量。灌药后第28d，各组动物分别再入代谢笼收集24h尿液，记录尿量，断尾采血。血标本用于检测血肌酐和钠；尿标本用于检测尿肌酐、钠及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)。第29d动物在乙醚麻醉下，经大鼠内眦采血3ml，迅速注入放在冰水溶液中冷却的酶抑制剂抗凝管中摇匀，4℃下1000r/min离心5min，分离血浆，放入冰箱-20℃保存。待标本收集齐后，同时检测血浆肾素（PRA）、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及醛固酮(ALD)的含量。然后在严格的无菌条件下开腹，取左肾标本固定于40g/L多聚甲醛液中，用于常规病理检查。

　　14  测定方法  血、尿标本肌酐（Cr）测定采用去蛋白终点法，钠的测定采用火焰光度法，按标准公式计算内生肌酐清除率(Ccr) 及滤过钠排泄分数(FENa)；NAG测定采用对硝基酚比色法，结果以酶单位与同一样品尿肌酐比值表示(U/g Cr)。肾素活性、血管紧张素Ⅱ及醛固酮的放射免疫分析按试剂盒（北京北方生物技术研究所）说明书操作。放射性测量使用SN-682型γ计数器（上海核福光电仪器有限公司）。

　　15  病理检查  常规石蜡切片，苏木素-伊红（HE）染色。应用MPIAS-500多媒体彩色病理图文分析系统（同济医科大学清平影像工程公司研制）,在100倍视野下观察、测量。病理观察及半定量评分标准参照有关报道〔2,3〕，观察20个以上高倍视野。肾小管损伤标准：细胞空泡变性，肾小管塌陷(与间质纤维化和肾小管膜增厚无关)及肾小管肿胀；肾间质损伤标准：单个核细胞浸润，间质细胞空泡变性，水肿及间质纤维化、瘢痕化；肾小球小动脉病变：观察并计算100个肾小球，计数入球小动脉受损伤的百分比，其病变病理特征为入球小动脉的玻璃样变或肌性增厚。标准：0为正常；05为<5%组织损伤；1为5%～20%损伤；15为21%～35%损伤；2为36%～50%损伤;25为51%～65%损伤；3为>65%损伤。

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