【摘要】 目的 研究锰对雄性小鼠生殖能力的影响，并探讨其时间-效应和剂量-效应关系。方法 将雄性小鼠随机分为3个染锰组和1个对照组，分别给予腹腔注射75，150，300mg/kg氯化锰和生理盐水，于染锰第3，7，14，28，56d处死小鼠5只/组。观察小鼠睾丸脏器系数和染锰56d各组雄性小鼠生殖能力、曲细精管横截面积及生精上皮细胞数量。结果 染锰56d，与对照组比较，15和30mg/kg组睾丸脏器系数差异有统计学意义（P<005，P<001）；30mg/kg组生育指数和总死胎率差异有统计学意义（P<005，P<005）；3个染锰组的平均着床数与平均活胎率差异均有统计学意义（P<001）；曲细精管横截面积和生精上皮细胞数差异均有统计学意义（P<001）。结论 各剂量的MnCl2对雄性小鼠生殖能力均有损害作用，以染锰56d，30mg/kg对雄性小鼠生殖能力的损害最为严重。
【关键词】 氯化锰
锰是一种较常见的职业毒物。近年来，随着现代工业的发展，锰的生产和消费日益增多，锰与生殖健康的关系逐渐引起人们的重视〔1〕。有研究表明，若机体摄入过量的锰，会导致睾丸组织发生病理学改变，性功能障碍及睾丸组织生化酶学的改变〔2〕。本实验采用氯化锰染毒小鼠，动态观察小鼠睾丸脏器系数；检测小鼠染锰56d生育指数及生殖指标的变化；定量组织学分析生精上皮细胞数的变化，以探讨锰对雄性小鼠生殖毒性的剂量-效应关系。
1 材料与方法
11 动物 6～8周雄性昆明种小鼠140只，体重23～28g(贵阳医学院实验动物中心)，均为普通级动物，合格证号为scxk 2002-0001。普通饲料饲养。
12 主要试剂及仪器 MnCl2·4H2O(分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司)；电子称（武汉自动化仪器厂）；BI2000图像分析系统（成都泰盟公司产品）。
13 方法
131 动物分组 雄性昆明种小鼠140只，随机分成3个染锰组和1个对照组，每组35只。
132 染锰方法 3个染锰组分别给予腹腔注射氯化锰（75,150和300mg/kg）。对照组采用等容生理盐水腹腔注射，每周5d，1次/d。每周测小鼠的体重1次，以调整用药量。
133 标本收集 分别于染锰3，7，14，28，56d每组随机抽取5只小鼠，脱臼法处死，立即分离双侧睾丸，生理盐水冲洗，用滤纸吸干后称重，用于测定睾丸脏器系数。取小鼠左侧睾丸迅速置于10%甲醛溶液内固定，常规方法脱水，石蜡包埋。
14 观察指标及方法
141 睾丸脏器系数 睾丸称重后按照公式：睾丸脏器系数=睾丸重（g）/小鼠体重（g）×100%。
142 生殖实验 于染锰第56d，将剩余各组小鼠（每组10只），分别与未经处理的成熟雌性小鼠1：1合笼一周后，取出雄鼠。雌鼠以合笼第1d为妊娠0d，于妊娠第19d处死，计录妊娠母鼠数、活胎数、死胎数。计算：(1)雄鼠生育指数（使交配雌鼠受孕的雄鼠数/总交配的雄鼠数×100%）；(2)每窝平均活胎数（活胎总数/受孕母鼠总数）；(3)平均着床数（胎鼠总数/受孕母鼠总数）；(4)总死胎数（死胎总数/胎鼠总数×100%）〔3〕。
143 定量组织学分析 取染锰56d睾丸用苏木素-伊红(HE)染色，每例切片一张，在图象分析仪下每例测定10个曲细精管的横截面积及管内生精上皮细胞数量。
15 统计分析 采用SPSS110统计软件进行分析。用方差分析进行检验。生育指数、总死胎率采用χ2检验。
2 结果
21 染锰剂量与时间对小鼠睾丸脏器系数的影响(表1) 由表1可见，于染锰第28d，30mg/kg组脏器系数开始降低，与对照组比较差异有统计学意义（P＜005）；染锰第56d，15与30mg/kg组睾丸脏器系数均与对照组比较差异有统计学意义（P＜005，P＜001）。
表1 染锰剂量与时间对小鼠脏器系数的影响（略）
注：与对照组比较，a P<005 , b P<001
22 染锰对雄性小鼠生育能力的影响(表2) 染锰56d，75，15mg/kg组生育指数低于对照组，但差异无统计学意义（P>005）；30mg/kg组生育指数低于对照组（P<005）；15，30mg/kg组总死胎率高于对照组（P<005;P<001）。
表2 染锰对雄性小鼠生殖能力的影响（略）
注：与对照组比较，a P<005,b P<001
23 染锰对小鼠曲细精管横截面积及管内生精上皮细胞数量的影响(表3) 定量组织学分析结果表明，染锰可使小鼠曲细精管横截面积明显减少，管内发育各阶段的生精细胞数量降低。染锰56d，各染锰组与对照组比较，其曲细精管横截面积及生精上皮细胞定量测定数值均明显减少（P<001）。
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