白藜芦醇联合5(2)

　　图2单用白藜芦醇、5FU和联用5FU加白藜芦醇（65 μmol/L） 48 h后MCF7细胞的形态学改变×200（略）

　　2.4凋亡细胞的形态学经Hoechst33258荧光染料染色，荧光显微镜下，正常细胞染色质均匀，核形态规则（图3A）. 65 μmol/L白藜芦醇或13 μmol/L 5FU作用48 h后，凋亡细胞即可出现，呈现细胞体积缩小，核固缩，染色质凝集、碎裂；两种药物联用后，凋亡细胞数进一步增加，形态学特征更加典型（图3B~D）.

　　3讨论

　　白藜芦醇能通过降低血液中胆固醇、抑制脂质过氧化而减少动脉粥样硬化、高血脂症的发生，能抑制血小板聚集从而阻止血栓形成，还有抑制自由基生成等作用［6-7］.  白藜芦醇抑制心血管疾病的广泛作用已经有不少研究. 新近实验证明，白藜芦醇能抑制乳腺上皮癌细胞的恶性生长、小鼠肝癌细胞恶变［1］，具有抗炎作用［8］. 这些实验结果已引起广泛关注.

　　本实验结果表明，白藜芦醇能在体外抑制4种人乳腺癌细胞系的生长，且随着剂量的增加，细胞生存率显著降低. 我们发现不同浓度白藜芦醇对细胞生长的影响不同，2~20 μmol/L的白藜芦醇促进细胞的生长，细胞生存率>100%；大于40 μmol/L浓度时，细胞生存率随药物浓度的增加而降低，这可能是“毒物兴奋效应”［9］.相差显微镜下可见，不同药物组干预后，MCF7细胞数量和形态的改变与MTT实验结果一致.

　　A:阴性对照；B:65 μmol/L白藜芦醇；C:13 μmol/L 5FU；D: 65 μmol/L白藜芦醇+13 μmol/L 5FU.

　　图3单用白藜芦醇、5FU和联用5FU加白藜芦醇诱导MCF7细胞凋亡的荧光染色×1000（略）

　　动物实验表明，5FU抑瘤率较高，同时其毒性反应也较重，主要表现为厌食、腹胀、精神萎靡、消瘦等症状；而白藜芦醇单用时无此类症状，和5FU联用时症状较轻，厌食、腹胀及消瘦不明显，说明白藜芦醇可减少化疗药物5FU对机体的毒性反应［10］. 本实验以MCF7细胞为主要研究对象，联用5FU和白藜芦醇后，MCF7细胞的生存曲线较单用5FU的生存曲线明显向左下方偏移，说明白藜芦醇能明显增强化疗药物5FU的抑癌效果. 65 μmol/L的白藜芦醇与13 μmol/L的5FU表现出明显的协同效应，两药联合应用后，凋亡细胞比例明显比单用任一种时升高. Hoechst33258荧光染色的实验结果也表明白藜芦醇可以促进5FU对MCF7细胞的促凋亡作用. 因此，白藜芦醇作为治疗乳腺癌的二线化疗药具有广阔的应用前景，这对于临床上提高抗癌化疗药物的治疗指数、降低毒副反应及延长患者的寿命，具有重要的意义.

　　【参考文献】

　　［1］ Jang M, Cai L, Udeani GO, et al. Cancer chemopreventive activity of resveratrol, a natural product derived from grapes ［J］. Science, 1997, 275(5297):218-220.

　　［2］   Gautam SC, Xu YX, Dumaguin M, et al. Resveratrol selectively inhibits leukemia cells: A prospective agent for ex vivo bone marrow purging ［J］. Bone Marrow Transplant, 2000, 25(6):639-645.

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　　［4］　李莹, 药立波, 王立峰, 等. 虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞HGC27凋亡 ［J］. 第四军医大学学报, 2004, 25(19):1797-1799.

　　［5］   Yamaue H, Tanimura H, Nakamori M, et al. Clinical evaluation of chemosensitivity testing for patients with colorectal cancer using MTT assay ［J］. Dis Colon Rectum, 1996, 39(4):416-422.

　　［6］   PaceAsciak CR, Rounova O, Hahn SE, et al. Wines and grape juices as modulators of platelet aggregation in healthy human subjects ［J］. Clin Chim Acta, 1996, 246(12):163-182.

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　　［8］ 李怡棠, 钟淼, 邓永江, 等. Ⅳ型变态反应中白细胞介素6的表达及白藜芦醇的抑制作用［J］. 药学学报, 1999, 34(3): 189-191.

　　［9］  Calabrese EJ. Paradigm lost, paradigm found: The reemergence of hormesis as a fundamental dose response model in the toxicological sciences［J］. Environ Pollut, 2005, 138(3):379-411.

　　［10］　刘红山, 潘承恩, 齐咏, 等. 白藜芦醇合用5－FU对小鼠移植肝癌H22生长的影响 ［J］. 世界华人消化杂志, 2002, 10(1):32-35.

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