乳腺肿瘤克隆性检测方法的比较(2)-找论文网

　　2.3 各组样本GPCR和NPCR的扩增成功率比较见表1。

　　M：Marker； 1：normal breast tissue； 2：PeriPM；3和4： PeriPM伴ADH；5和6：DCIS

　　图1 琼脂糖凝胶电泳图（略）

M是Marker,每相邻两个泳道如1和2、3和4、5和6、7和8是同一样本酶切前后的带型

　　图2 经NPCR和GPCR扩增各组病变的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图（略）

　　3 讨论

　　最近10年,基于Ｘ染色体多态性为基础的克隆性分析技术已经逐步得到完善,已成为一种重要的分子病理学手段, 其中聚合酶链反应技术发挥了无法估量的作用。聚合酶链反应技术简称PCR技术，是一种利用DNA变性和复性原理在体外进行特定的DNA片断高效扩增的技术， PCR技术不但能有效地检测基因的突变，而且能准确检测癌基因表达量。例如有研究报告CD44基因的异常拼接表达，几乎100%出现于某些泌尿系肿瘤，而对照组完全没有这种异常表达[2]。巢式聚合酶链反应（NPCR）也称套式PCR。在这种技术中，首先用一对外引物进行第一轮PCR，然后再使用第一对引物扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩散，所以称为巢式PCR。由于使用了两对引物并且进行了两轮扩增反应，因此我们一般认为试验的敏感性增强。巢式PCR应用较广，比如在孕妇外周血中扩增男性胎儿单拷贝序列DNA,即DYS14基因，可以作为性相关基因疾病的产前诊断方法[3]；检测肉芽肿中副结核分支杆菌，用以探讨Crohn’s病的发病机制[4]；而且还能用于检测潜在的肿瘤标志物，Ioannidis 等[5]利用巢式PCR在58.5％的乳腺癌中检测到不稳定编码区结合蛋白（Coding Region instability DeterminantBinding Protein，CRDBP）表达。但在一定情况下，NPCR增加了每次试验的复杂性，因为它需要两次配制PCR体系，两轮PCR分开进行，而且，在NPCR测定中，灵敏度过高可能会导致假阳性率增加。在导致PCR假阳性的因素中，产物污染是最严重、但又是可以避免的因素之一。通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性。

　　表1 各组样本GPCR和NPCR的扩增成功率对比表（略）

　　结果显示经GPCR和NPCR后扩增成功例数略有不同，但其阳性率差异无显著性

　　将克隆性分析技术用于临床病例检测，需要省时、价低、易于操作，又要保证特异性和敏感性的方法，所以本实验将聚合酶链反应过程做一下改进，比较了正常组织、UDH和/ periPM、癌前病变即ADH和/periPM伴ADH、导管内癌不同病例组采用GPCR和NPCR的检测结果，其敏感性差异均无显著意义，而且两种方法扩增效果是一致的。

　　GPCR不但简化操作步骤，节约试剂，检测过程仅需2天时间，而且极大地减少了交叉污染的可能性，如果能首先解决好处理标本过程中目的基因的得率问题，那么就可以取得事半功倍的效果，在一定范围内还可能提高扩增的特异性。因此，应用GPCR检测常规石蜡包埋组织中乳腺肿瘤组织DNA特异性序列片段具有比NPCR更大的临床实用价值。今后还将进一步探讨从新鲜组织标本所得DNA样本的克隆性分析，以更有利于临床诊断和鉴别诊断。

【参考文献】
　　［1］朱少君，苏勤，王淑芳，等.女性外阴尖锐湿疣的克隆性[J].诊断病理学杂志，2003,10(2):8184.

　　［2］ Raj Gv, Moreno JG, Gomella LG. Utilization of polymerase chain reaction technology in the detetion of solid tumors[J]. Cancer, 1998, 82(8):14191441.

　　［3］迟洪滨,康志海,胡桂英，等.应用套式聚合酶链反应技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究[J].中华妇产科杂志,1999,34(1)：2729.

　　［4］ Ryan P, Bennett M W, Aarons S, et al. PCR detection of Mycobacterium paratuberculosis in Crohn’s disease granulomas isolated by laser capture microdissection[J].Gut,2002, 51(5): 665670.

　　［5］ Ioannidis P, Mahaira L, Papadopoulou A, et al. 8q24 Copy number gains and expression of the cmyc mRNA stabilizing protein CRDBP in primary breast carcinomas[J]. Int J Cancer, 2003 ,104(1):5459.

共2页: 上一页 [1] 2

Ⅰ期原发性肝癌三维适形放疗的疗效评价和预后多因素分析

肿瘤相关抗原在人大肠癌中的表达