作者:柴斌,杨述华,王渝,余理瑶,杨操
【摘要】 目的 研究BMP2、OPN、VEGF在骨肉瘤组织中的表达,探讨其与骨肉瘤肺转移的关系。方法运用免疫组织化学SABC法,检测53例有完整随访资料的骨肉瘤病例中BMP2、OPN、VEGF的表达。结果 ①BMP2、OPN和VEGF的阳性表达均定位于细胞胞浆,BMP2、OPN和VEGF在53例骨肉瘤组织中的阳性表达率分别为62.26%(33/53)、50.94%(27/53)和67.92%(36/53)。②在已发生肺转移的骨肉瘤组织中BMP2、OPN和VEGF的阳性表达率分别为92.3%(12/13)、76.92%(10/13)和92.3%(12/13),明显高于无肺转移的骨肉瘤组织中BMP2(52.5%,21/40)、OPN(42.5%,17/40) 和VEGF(60%,24/40)的阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。③三者在骨肉瘤组织中的阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、肿瘤部位、组织学类型、发病时间等因素差异无统计学意义(P>0.05),但与是否肺转移显著相关。结论 BMP2、OPN及VEGF在骨肉瘤中有着不同程度的高表达,与骨肉瘤的发生发展,并与骨肉瘤肺转移密切相关,BMP2的表达分别和OPN、VEGF的表达密切相关。
【关键词】 骨肉瘤;BMP2;OPN;VEGF;肺转移
Abstract:Objective To investigate the expression of BMP2,Of osteopontin(OPN) and VEGF in osteosarcoma and its association with lung metastasis. Methods Immunohistochemical staining (SABC method) was used to investigate BMP2, OPN and VEGF expression in 53 cases of osteosarcoma which had complete follow up data. Results BMP2, OPN and VEGF expression was all located in the cytoplasm of osteosarcoma cell. The positive rates of BMP2, OPN and VEGF in osteosarcoma tissue were 62.26%,50.94% and 67.92%,respectively. The positive rates of BMP2, OPN and VEGF in osteosarcoma tissue with lung metastasis were 92.3%(12/13), 76.92%(10/13) and 92.3%(12/13), respectively, which were much higher than that in osteosarcoma tissue without lung metastasis. BMP2, OPN and VEGF positive was remarkably correlated the and lung metastasis in osteosarcoma.(P<0.05).The intensity signal of BMP2, OPN and VEGF weren't related to gender, age, size and location of tumor , time of illness, osteosarcoma classification, while they were correlated with lung metastasis. Conclusion BMP2, OPN and VEGF are express in osteosarcoma cell. The high expression involve in the carcinogenesis and the development of osteosarcoma and correlated closely to the lung metastasis of osteosarcoma. The expression of BMP2 is closely correlated to that of OPN and VEGF.
Key words:Osteosarcoma Immunohistochemical;BMP2;OPN;VEGF;Lung metastasis
0 引言
骨肉瘤是儿童、青少年中最常见的恶性骨肿瘤。骨肉瘤的侵袭、转移机制一直是骨肿瘤研究领域的一个热点。有研究表明,骨形态发生蛋白(BMP)在骨肉瘤发病和转移中起重要作用,其中BMP2的作用尤其突出,骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)同样被发现在肿瘤的侵袭和转移中有着重要作用[1,2]。肿瘤血管的生长无疑是肿瘤发生侵袭和转移的重要因素,许多血管生长因子在肿瘤中均有表达,介导血管新生。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor,VEGF)是其中效力最强的因子之一,它可直接或间接地参与血管新生的每一个过程。本试验用免疫组织化学染色的方法,研究BMP2、OPN和VEGF在53例骨肉瘤组织中的表达及分布,以及与骨肉瘤肺转移的相关性以了解它们在骨肉瘤侵袭和转移中的生物学作用及其临床意义。
1 材料与方法
1.1 实验材料
收集同济医学院附属协和医院2003年1月~2005年6月手术切除骨肉瘤石蜡包埋标本53例,其中男35例,女28例,年龄10~49岁,平均年龄21.5岁,术前均未行化疗、放疗及其他抗肿瘤治疗。所有标本均经4%甲醛固定,常规石蜡包埋,5μm厚的连续切片,HE染色,病理确诊。肿瘤大小:直径5~22cm,≥10cm 38例,<10cm 25例。肿瘤部位:股骨26例,胫腓骨17例,肱骨10例。组织学分型按WHO标准分型,其中成骨细胞型21例,成软骨细胞型17例,成纤维细胞型12例,小细胞型3例。另取11例正常骨组织标本做对照。
1.2 主要试剂
兔抗人BMP2多克隆抗体(BA0585),兔抗人VEGF单克隆抗体(BAO407),兔抗人OPN单克隆抗体(BA1678),SABC染色试剂盒,均购自武汉博士德公司。
1.3 实验方法
免疫组织化学染色方法:BMP2、OPN、VEGF染色按SABC染色试剂盒说明操作,石蜡切片经脱蜡,梯度酒精水化后,用3%H2O2甲醇室温孵育15min,热修复抗原处理20min,加入5%山羊血清孵育1h后再分别加入一抗(工作浓度为1:150)4℃过液,再分别加入二抗及SABC作用30min,DAB显色,苏木素复染。
1.4 结果判定
判断标准:光镜下观察染色的切片,胞浆内出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。随机观察5个高倍视野以阳性细胞所占比例分为:-(<5%);+(6%~25%);++(26%~50%);+++(>51%)。
1.5 统计学处理
采用SPSS13.0统计软件包进行χ2检验并计算Spearman相关系数,P<0.01为有统计学意义。