板蓝根对机体免疫功能及流感病毒FM1的作用(1)

          作者：金明哲， 任东鲜，孟繁平，李晓眠

【关键词】  板蓝根；,,流感病毒；,,淋巴细胞；,,红细胞免疫黏附；,,抗病毒作用

　　摘要：目的研究板蓝根提取物对小鼠机体免疫功能的影响及其抗流感病毒(FM1)的作用。方法昆明种小鼠腹腔注射板蓝根提取液，检测红细胞免疫黏附功能等各项免疫指标;昆明种小鼠滴鼻感染流感病毒FM1后腹腔注射板蓝根提取液，观察板蓝根提取液的抗病毒作用。结果与正常对照组相比，板蓝根组脾指数增加（P ＜0.05）；T、B淋巴细胞刺激指数、RBCC3bR花环阳性率都明显增高，RBCIC花环阳性率显著降低，有显著性差异（P＜0.01）。与阴性对照组相比，板蓝根组肺指数降低（P＜0.05），体重增加值高（P ＜0.05)。结论 板蓝根提取物具有很强的增强机体免疫功能的作用，其提高红细胞免疫系统功能的作用极其显著；同时板蓝根提取物也有一定的抗流感病毒作用。

　　关键词：板蓝根；  流感病毒；  淋巴细胞；  红细胞免疫黏附；  抗病毒作用

　　Abstract：ObjectiveTo study the strengthening function of extract of Radix Isatidis on immune system in Kunming mice and its antiviral effects on influenza virus (FM1). MethodsExtract of Radix isatidis was intraperitoneally injected to Kunming mice. Lymphocyte proliferation assay and rosette formation test were used to measure the cellular immune function and humoral immune function and erythrocytic immune adhesive function of mice. FM1 virus was dropped nasally in Kunming mice, then the animals were control intraperitoneally injected extract of Radix isatidis, the antiviral effects of Radix isatidis were observed.ResultsCompared with control group,spleen index in the Radix Isatidis group increased（F=4.578, P ＜0.05）. Compared with control group, SI of T lymphocyte in the Radix Isatidis group increased significantly（F=15.537, P ＜0.01）, SI of B lymphocyte  increased obviously（F=11.050, P ＜0.01）, and the rate of RBCC3bR was increased（F=7.865, P ＜0.01）, too. Compared with control group the rate of RBCIC in the Radix Isatidis group decreased greatly（F=20.354, P ＜0.01）. Compared with negative group, Lung index in the Radix Isatidis group decreased（F=47.020, P ＜0.05）. The degree of change in weight of that group was higher than negative group（F=25.877, P ＜0.05）. ConclusionRadix Isatidis has strong strengthening function on immune system in Kunming mice, its enhancing function on red cell immune adherence (RCIA) is extremely significant. Moreover，it also has antiviral effects on influenza virus.

　　Key words：Radix Isatidis;   Influenza virus;   Lymphocyte;   RCIA;   Antiviral effects
   
　　中药板蓝根为十字花科菘蓝属植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的根，性寒味苦，有清热解毒、凉血消肿的功效。随着国际上应用天然药物的热潮，板蓝根的药理活性及其有效成分得到了深入的研究，并引起了国内外学者的广泛关注，但是关于板蓝根制剂对红细胞免疫功能的作用却少有报道。1981年美国的Siegel［1，2］在前人研究的基础上提出了“红细胞免疫系统(RCIS)”的新概念。近20多年来国内外学者对红细胞免疫功能进行了大量研究，红细胞的免疫功能逐渐被人们所认识，红细胞免疫已成为近年来免疫学研究中的一个新课题。

　　1  器材

　　1.1    病毒流感病毒鼠肺适应株（FM1），由天津医科大学微生物实验室培养提供。

　　1.2  鸡胚9～11日龄鸡胚，购于天津市羽丰种鸡场。

　　1.3  药品注射用胸腺肽：辽宁天龙药业有限公司，批号：国药准字H20003786；盐酸吗啉胍片（病毒唑）：山西津华药业有限公司，批号：国药准字H14023058；板蓝根提取液：安徽产板蓝根,以70%乙醇渗漉法提取。

　　1.4   动物 昆明种小鼠（雄），14～16 g，北京大学医学部实验动物科学部提供,许可证编号：scxk(京)20020001。

　　1.5   试剂刀豆蛋白（ConA）：sigma分装，批号：C2010；脂多糖（LPS）：sigma分装，批号：L2880； MTT：sigma分装，批号：M2128；RPMI1640培养基干粉：Gibco分装,批号：1181499；新生牛血清（NCS）：HyClone分装，批号：AJM11171。

　　1.6  仪器二氧化碳培养箱，美国Forma Scientific公司；酶标光度计，美国BIORAD公司；电子天平，日本A&D 公司；B600超低速自动平衡离心机，白洋离心机厂；LDZ52平板离心机，北京医用离心机厂；SHP250B生化培养箱，天津天宇机电有限公司。

　　2  方法

　　2.1   FM1的培养及其LD50的测定［3］    9～11日龄鸡胚30枚，采用尿囊腔接种法培养繁殖流感病毒，滴定血凝效价，将血凝效价为1:640的鸡胚尿囊液收集在一起，作为本次实验使用的FM1原液。将FM1原液十倍倍比稀释，得到101，102，103，104，105浓度的病毒液。取昆明种小鼠50只，随机分5组，10只/组，乙醚轻度麻醉后，各组分别滴鼻给予以上5种浓度的病毒液50 μl，观察14 d，统计各组死亡数。结果见表3。使用ReedMuench法测得此流感病毒的LD50为10－3.2。

　　2.2   板蓝根提取液增强机体免疫功能的作用

　　2.2.1   动物分组及给药方法  昆明种小鼠30只，随机分3组，10只/组，给药方法见表1。给药 7 d后，先禁食、水8h以上，称重后摘眼球放血处死，收集血液，并无菌解剖取胸腺和脾脏，测定胸腺指数和脾指数，检测脏器比［4］、细胞免疫功能、体液免疫功能和红细胞免疫功能等多项免疫指标。

　　胸腺（脾）指数＝胸腺（脾）重量     小鼠体重×100％

　　表1  动物分组及给药方法（略）

　　2.2.2   细胞免疫功能（T细胞增殖试验）［5～8］  常规制备5×106/ml脾细胞悬液备用。在96孔板上加脾细胞悬液100 μl/孔，每份设3个复孔，另设3个空白对照孔；再加20 μg/ml浓度的ConA50 μl，空白对照孔加RPMI1640培养液50 μl；用含10％NCS的RPMI1640培养液加至200 μl，使ConA的终浓度为5 μg/ml，置37℃，5％CO2温箱培养66 h；各加5 mg/ml的MTT10 μl，混匀后继续培养6h；加DMSO100 μl，充分混匀，静置10 min，用酶标光度计测波长570 nm的OD（光密度）值，以SI［6］（刺激指数）反映细胞增殖程度（结果见表4）：

　　SI＝试验孔OD均值/对照孔OD均值

　　2.2.3   体液免疫功能（B细胞增殖实验）［8，9］  在96孔板上加脾细胞悬液100 μl/孔，每份设3个复孔，另设3个空白对照孔；再加入100 μl浓度为 20 μg/ml的LPS作为刺激剂，LPS终浓度为10 μg/ml，空白对照孔则加RPMI1640培养液100 μl；然后置于 37℃，5％CO2温箱66 h；各加5 mg/ml的MTT10 μl，混匀后继续培养6 h；加DMSO100 μl，充分混匀，静置10 min，测波长570 nm的OD值，计算SI（结果见表4）。

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