作者：史冰 陈晓阳 李晟 秦莉花 吴晓军 陈容 邹志
【摘要】 目的 观察忧虑康药（浸膏）对肾阴虚型抑郁模型大鼠行为学和血浆cAMP、cGMP的影响及毒性试验。方法 采用灌胃甲状腺素合并慢性不可预见性应激制成肾阴虚抑郁动物模型后，随机分为空白对照组、模型组、六味地黄丸组、氟西汀组、忧虑康低、中、高剂量组，观察各组大鼠敞箱试验和液体消耗试验等行为学变化，采用放射免疫方法检测血浆cAMP、cGMP含量。并进行急性毒性试验，计算小鼠最大耐受量。结果 肾阴虚抑郁模型大鼠敞箱试验和液体消耗试验各项指标均显著下降，血浆cAMP含量显著升高；忧虑康药能部分改善大鼠的抑郁行为，六味地黄丸和忧虑康均能显著降低大鼠血浆cAMP含量。小鼠灌服忧虑康药1日最大耐受量为360g/kg，相当于人临床用量（1.2g/kg）的300倍。结论 呈量效关系的忧虑康药影响大鼠行为学和调整血浆cAMP、cGMP平衡，可能正是其滋阴解郁的作用机制之一；该药是安全范围较大的药物，提示用于临床是安全的。
【关键词】 忧虑康；肾阴虚；抑郁症；环腺苷酸；环鸟苷酸；急毒
The effects and toxicity experimental research of You Lv Kang on animal depression behavior and cAMP,cGMP in the plasma
【Abstract】 Objective To objective the effects of You Lv Kang on the cAMP、cGMP in the plasma of modeling rats following renal yin deficiency and on the behavior of these animals and toxicity test.Methods Rats were divided into seven groups randomly: control,model,Liu Wei Di Huang Wan,fiuoxetine, the low、middle and high-dose group of You Lv Kang.To establish the modeling rats following renal yin deficiency by exposing the animals to chronic stress depression and giving them by intragastric adminstration.To observe the behavior changs in the open-field test and fluid comsumption test. the plasma samples of experimental rats were taken for cAMP and cGMP determination by radioimmunoassay.To compute maximally tolerated dose of rats by acute toxicity test. Results All the indexes of the model rats in the open-field test and fluid comsumption test were significantly decreased, the plasma concentration of cAMP was significantly elevated;You Lv Kang can partly improve the behavior of the rats,the plasma of cAMP were significantly decreased in the Liu Wei Di Huang Wan and You Lv Kang groups.The maximally tolerated dose of mouse were 360g/kg every day,equivaent 300 times of clinic doses（1.2g/kg）.Conclusion One of the mechanism of increasing yin and improving depression was the effects of The You Lv Kang on the behavior changs of the rats and on adjusting the balance between the cAMP and CGMP.safety margin of drug is bigger,which suggest the drug is safe in clinic.
【Key words】 You Lv Kang;renal yin deficiency;depression;cAMP;cGMP; acute toxicity test
抑郁症是一种包括精神症状和躯体症状的复杂的情感性精神障碍，属中医“郁病”范畴，肾阴虚证是郁病证型之一，由于长期情志不畅，以致耗伤阴精，髓海不充所致，尤多见于疾病中、后期及老年人群〖1〗。近年来虽然单就抑郁症以及肝肾阴虚证的研究较多，但将它们联系在一起进行实验室研究却少有报道。本文通过采用慢性轻度不可预见性的应激模型+甲状腺素的方法，造成大鼠抑郁阴虚状态，观察临床用于治疗抑郁症有良好疗效的忧虑康药〖2〗对肾阴虚抑郁模型大鼠行为学及血浆cAMP、cGMP的影响，初步探讨该药滋肾阴抗抑郁的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 健康SD大鼠，雌雄各半，体重170～190g（购自长沙开福区东创科技服务部）。昆明小鼠，雌雄各半，体重18～22g（购自湖南中医药大学实验动物中心，合格证号：20-001）。
1.1.2 药物及试剂 忧虑康药临床用量为每天80g，按处方称取药材（湖南中医药大学附属医院提供熟地黄15g，何首乌15g，郁金10g，丹参15g，当归15g，石斛10g等），水煎2次,过滤，合并滤液,浓缩成相应浓度（浸膏），4℃保存备用；六味地黄丸（湖南省长沙九芝堂股份有限公司生产，产品批号：20050219）；盐酸氟西汀胶囊（常州华生制药有限公司，产品批号：80706001）；甲状腺素片（济南维尔康生化制药有限公司，产品批号：05055050）；环腺苷酸（cAMP）、环鸟苷酸（cGMP放免分析试剂盒:上海中医药大学同位素科，生产批号：061120）。
1.1.3 仪器 敞箱（自制）：由不透明材料制成，底面为100cm×100cm的正方形，被等分为25个等边方格，高50cm；放射免疫计数器（GC-1200γ放射免疫计数器, 中国科学技术大学科技实业有限公司）；电子天平（型号:ES-C-600电子天平,湘仪天平仪器有限公司）；低温大容量高速离心机（型号：KDC-2046 低温大容量离心机,中国科学技术大学科技实业有限公司）；秒表；止血钳；恒温烘箱等。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 试验前，进行敞箱试验和液体消耗试验， 根据敞箱试验和液体消耗试验的结果筛选大鼠，共56只，随机分为7组：空白对照组（简称空白组）、模型对照组（简称模型组）、盐酸氟西汀组（简称氟西汀组）、六味地黄丸组（简称地黄丸组）、忧虑康液低剂量组（简称ylk低剂量组）、忧虑康液中剂量组（简称ylk中剂量组）、忧虑康液高剂量组（简称ylk高剂量组），每组8只。
1.2.2 肾阴虚抑郁模型的建立及给药 根据文献〖3，4〗略有改进，采用灌胃甲状腺素合并慢性轻度不可预见性应激法，建立“肾阴虚抑郁病证”复合模型。造模方法：将4℃ 冰水游泳5min，禁食禁水24h，夹尾1 min，明暗颠倒24h，陌生物品（如塑料杯、碎布头等），潮湿垫料、鼠笼倾，40℃高温环境，电击足底（18V）。共8种刺激随机安排在21日中，每日1种，使大鼠不能预料刺激发生，以避免产生适应性。同时，每日灌胃甲状腺素2.5mg/（kg·d），造成大鼠抑郁+肾阴虚状态。 各组从实验第7日起，氟西汀组给予盐酸氟西汀3.6mg/kg；地黄丸组给予六味地黄1.6g（生药）/kg； 忧虑康低、中、高剂量分别给予忧虑康液7.2g（生药）/kg、14.4g（生药）/kg、28.8g（生药）/kg；空白组与模型组均灌胃等容量蒸馏水。各组灌胃容量均为10ml/kg，每日1次，连续给药14天。除空白组外均单笼饲养。
1.2.3 观察模型动物一般状态及体重变化 实验过程中观察大鼠外表、性情、活动情况、饮水量、大便情况，每周测1次体重。
1.2.4 液体消耗试验〖4〗 试验前，在隔噪音、安静的房间内，训练动物适应含糖饮水，每笼同时放置2个水瓶，第1个24h，两瓶均装有1％蔗糖水，随后的24h，1个瓶装1％蔗糖水，1个瓶装纯水。23h禁食禁水后，进行动物的基础糖水／纯水消耗试验，同时给予每只大鼠事先定量好的2瓶水：1瓶1％蔗糖水，1瓶纯水。60min 后，取走2瓶并称重。计算动物的总液体消耗、糖水消耗、纯水消耗、糖水偏爱（糖水偏爱%=糖水消耗/液体消耗×100％）。每周进行1次液体消耗试验。
1.2.5 敞箱试验〖5〗 安静的房间内进行此项试验观察。将大鼠置于中心方格内，观察大鼠在5min 内中央格停留时间（s）、穿越格数（四爪均进入的方格方可记数，为水平运动得分）、后肢直立次数（两前爪腾空或攀附墙壁，为垂直运动得分）、清洁运动记数、粪便粒数。彻底清洁敞箱后再进行下1只大鼠的观察。每只观察1次。每周进行1次敞箱试验。
1.2.6 血浆cAMP、cGMP的测定 实验第22天，所有动物，断头采血，取血1～2ml，注入含EDTA·Na2 50μ1的试管中，摇匀放入冰浴中，1h内，4℃离心2000rpm离心10min，置于-15℃～-20℃保存，用于测定。测定时严格按试剂盒说明进行操作。
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