【摘要】 目的 观察白及胶对成纤维细胞形态及活性的影响。方法 分离培养日本大耳白兔胆管成纤维细胞，加入不同浓度白及胶进行共同培养，在光镜下观察日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的改变，用MTT法比色法检测日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性。结果 白及胶组成纤维细胞胞体较小，胞突少，多呈圆形，胞核较小。白及胶组0.1、1.0、10.0 mg/mL白及胶在作用72 h时成纤维细胞活性与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。结论 白及胶对日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的影响及白及胶对日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性的抑制作用，可能是白及胶防治日本大耳白兔腹腔粘连的机制之一。
【关键词】 成纤维细胞；白及胶；药物作用
Influence of Hyacinth bletilla decocted water on fibroblastic morphology and activity from culture rabbit biliary duct
【Abstract】Objective To observe the influence of Hyacinth bletilla decocted water on fibroblastic morphology and activity. Methods Fibroblastic cells were separated from culture rabbit biliary duct.The different concentration of Hyacinta bletilla decocted water were added and cocultured.Changes of fibroblastic morphology were observed by light microscope.Fibroblastic activity were detected by MTT colorimetric method.Results In Hyacintn bletilla group fibroblastic cell hare small soma,a little spine.There was obvious difference on fibroblastic activity between control group and Hyacintn bletilla group at 0.1,1.0,10.0 mg/mL on 72 h(P＜0.01，P＜0.05).Conclusion Hyacinth bletilla decocted water have inhibition effect on fibroblastic activity from rabbit biliary duct.
【Key Words】 Fibroblastic cell;Hyacinth bletilla;Drug effect
成纤维细胞（fibroblast，FB）在损伤的修复过程中发挥着重要作用。过度活化的成纤维细胞可导致损伤部位纤维组织增生，是粘连形成的重要因素。目前，尚缺乏有效的药物加以防治。控制FB的生物学特性和增殖功能是预防术后粘连形成的基础和关键。我们应用体外培养的兔胆管成纤维细胞，观察白及胶对成纤维细胞形态及增殖活性的影响，探讨白及胶防治术后腹腔粘连的可能机制。
1 材料与方法
1.1 材料
日本大耳白兔1只，雄性，体质量3 kg，由天津实验动物中心津南区明禾养殖场提供，动物合格证号:07311。MCO-15A型CO2培养箱为日本SANYO生产；超净工作台为天津医药净化设备厂生产；TDL-40 B离心机为上海科学仪器厂生产；Anthos2010型全自动酶标仪为奥地利生产；WZS-A微量振荡器为无锡医用器材公司生产；COIC型倒置显微镜由重庆光学仪器厂生产。
1.2 方法
1.2.1 白及胶的制备
将白及粗粉加适量蒸馏水浸泡过夜,煎煮2次，每次30 min。合并煎液,用双层纱布滤过，4 000 r/min离心15 min。除去沉淀，滤液浓缩至每mL相当于生药1 g，加95%乙醇，使醇含量达70%,搅匀，静置过夜,滤去乙醇，沉淀水浴挥净乙醇,沉淀加蒸馏水,搅匀(每mL相当于白及生药1 g),得白及胶。
1.2.2 成纤维细胞的制备［1］
日本大耳白兔禁食16 h，20%乌拉坦(1 g/kg体质量)耳缘静脉注射麻醉，无菌开腹找到胆管，近肠壁端止血钳钳夹损伤胆管1.5 cm后关腹。72 h后再次无菌手术取胆管2 cm，放入含有青霉素及链霉素的0.9%氯化钠注射液中，在净化台中无菌操作剖开胆管，反复冲洗，尽量刮除胆管黏膜层，眼科剪刀剪碎成约1 mm3的组织碎块，加入Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM)营养液放入25 mL培养瓶中，瓶底倒置于CO2孵育箱中2 h，尽量使组织块与培养瓶壁粘附后补足含15%血清DMEM营养液培养细胞，营养液3日换液1次，待成纤维细胞至接近长满培养瓶底后，移除组织块用0.25%胰蛋白酶消化传代，待细胞生长旺盛时用于实验。
1.2.3 白及胶对成纤维细胞形态的影响
将生长良好的成纤维细胞制成细胞悬液，调整细胞密度，接种于含盖玻片的2块培养皿中，其中1块加白及胶为白及胶组，另1块加入等量的培养液为对照组，放入CO2孵育箱培养72 h，待细胞基本长成单层，取出盖玻片，95%乙醇固定，染色，封片，显微镜观察，照相保留结果。
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