1.2.4 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响
用0.125%胰蛋白酶消化成纤维细胞，细胞悬浮后加入50 mL离心管中；1 500 r/min 10 min离心洗细胞2次，弃上清后加入DMEM或RPMI-1640（细胞培养基）完全营养液重新悬浮细胞充分混匀。台酚兰染色，计数细胞成活率＞95%，调细胞数至1×104/mL。将1×104/mL细胞悬液充分混匀后加入96孔板中。96孔板每孔0.15 mL。分别将10.0、1.0、0.1 mg/mL浓度的白及胶加入96孔板，做6个平行孔。放入5% CO2孵育箱中培养分别于24、48、72 h测定细胞活性。培养结束前4 h掺入MTT（5 mg/mL）20 μL继续培养至结束，弃培养上清液加入1∶300盐酸-异丙醇溶液100 μL，微量震荡器震荡10 min，用2010型全自动酶标仪620 nm测定OD值。
1.3 统计处理
经SPSS 11.0统计软件进行方差分析，比较各组差别,以P＜0.05为有统计学意义。
2 结 果
2.1 白及胶对成纤维细胞形态的影响
对照组细胞胞体较大，胞浆丰富，胞突多，呈多角型或梭型，胞核大，有形成细胞增殖巢趋势，见图1。白及胶处理组成纤维细胞胞体较小，胞突少，多呈圆形，胞核较小。见图2。
2.2 不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响
见表1。表1 不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响（略）
由表1可见，0.1、1.0、10.0 mg/mL白及胶均在作用72 h时显示出对成纤维细胞增殖具有显著的抑制作用。
3 讨 论
术后腹腔粘连形成是一个复杂的过程，涉及到生物化学及生物物理的多方面因素。多项研究表明，受损的浆膜创面和相邻腹膜的接触是粘连形成的重要因素，所以选择保护隔离创面的方法是一种行之有效的预防措施［2］。
随着细胞生物学和分子生物学的迅速发展，近年来有证据表明，成纤维细胞与术后腹腔粘连的形成有着密切关系。有研究证实，腹膜损伤后，其中有大量成纤维细胞被激活，激活的成纤维细胞自身可分泌大量细胞外基质，分泌多种细胞因子，其他多种炎型细胞分泌的炎症因子对成纤维细胞均有显著刺激作用，这些均与粘连的形成有密切联系［3］ 。因此，抑制成纤维细胞的增殖与活化可能是预防术后腹腔粘连的重要措施。
成纤维细胞是一种主要修复细胞，其生物学特征被认为是创伤愈合于纤维化过程中起主要作用的因素。其生物学活性包括：①参与细胞的迁移与增生；②合成多种细胞外基质（ECM），主要包括胶原、纤维黏连蛋白、弹力蛋白等；③释放胶原酶，降解细胞外基质；④分泌细胞因子调控自身增殖和合成功能，影响其他多种细胞参与愈合过程［4～6］。
中药白及为兰科多年生草本植物白及的干燥块茎，味苦、甘、涩，性微寒，归肺、肝、胃经。功效主收敛止血，消肿生肌。本研究发现，白及胶局部涂抹于损伤的浆膜表面，可以有效地减轻腹腔粘连的形成，因此推测中药白及可能对损伤局部成纤维细胞有一定的抑制作用。本研究应用体外培养的成纤维细胞，观察白及胶对其形态及增殖活性的影响，结果发现白及胶组成纤维细胞胞体较正常组小，胞突少，多呈圆形，胞核较小，而且0.1、1.0、10.0 mg/mL浓度白及胶均在作用72 h时显示出对成纤维细胞增殖具有显著的抑制作用，因此认为白及胶对成纤维细胞形态的影响及对成纤维细胞活性的明显抑制作用可能是白及胶防治腹腔粘连的机制之一。
【参考文献】
［1］陈宝莹，魏经国，王耀程，等.胆固醇对兔胆管成纤维细胞增生的影响［J］.世界华人消化杂志，2002，10（5）：566-570
［2］Zhang YD,Yao W,Wu C X,et al.Tropical application of halcinonide cream reduces the severity and incidence of intraperitoneal adhesions in a rat model［J］. Am J Surg,2002，184(1):74-77
［3］曾健，李晓辉.腹膜粘连的分子机制及药物防治［J］.世界华人消化杂志，2003，11（9）：14291432
［4］Laplante AF, Germain L, Auger FA, et al. Mechanisms of wound reepithelialization: hints from a tissueengineered reconstructed skin to longstanding questions［J］.FASEB J,2001,15(13):2377-2389
［5］Moulin V, Auger FA, Garrel D, et al. Role of wound healing myofibroblasts on re-epithelialization of human skins［J］.Burns,2000,26(1):3-12
［6］Kupfahl C,Pink D,Friedrich K,et al.Angiotensin Ⅱ directly increases transforming growth factor beta1 and osteopontin and indirectly affects collagen mRNA expression in the human heart ［J］.Cardiovasc Res,2000,46(3):463-475
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